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人肝细胞生长因子在毕赤酵母中的分泌表达及其活性

常冰梅  刘晓军  李美宁  张栋  张悦红  程牛亮  牛勃  
【摘要】:目的在毕赤酵母中分泌表达人肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF),并检测其活性。方法从真核表达质粒pRC/CMV-HGF中扩增HGF的编码基因,将其克隆入表达载体pPIC9K,构建重组表达质粒pPIC9K-HGF,电穿孔法转化毕赤酵母菌株KM71,PCR筛选阳性菌株,经甲醇诱导表达重组人HGF(rhHGF)。表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,检测其对原代培养的大鼠肝细胞增殖的影响。结果重组表达质粒pPIC9K-HGF经酶切和测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约80 000,表达量占菌体总蛋白的18%,可与兔抗人HGF多抗特异性结合,并可刺激大鼠肝细胞增殖。结论在毕赤酵母菌中成功分泌表达了rhHGF,表达产物具有促进肝细胞增殖的活性。

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