山东鹅观草SSR-PCR反应体系的优化和验证

【摘要】：山东鹅观草是一重要的小麦野生近缘种质资源,具有对黄矮病的高抗性和易于小麦杂交的高亲和性等优良性状。以CTAB法提取山东鹅观草叶片DNA为模板,进行反应PCR体系优化。选用20μL的PCR反应,对Mg2+浓度、dNTP浓度、引物、DNA模板和Taq酶5个因素设计5个水平进行体系优化和验证试验。先以1个SSR标记(Xgwm43-7B)对5个因素进行筛选。为了验证所选最优体系的稳定性,再选用9个SSR标记(Xgwm18-1B、Xgwm32-3A、Xgwm6-4B、Xgwm60-7A、Xgwm67-5B、Xgwm77-3B、Xgwm88-6B、Xgwm95-2A和Xgwm99-1A)进行验证性试验。单因素试验结果表明PCR反应最佳体系为:20μL反应体系,2μL的10×PCR Buffer,2.875mmol/L的Mg2+,200μmol/L的dNTP,3 pmol的引物,45 ng的模板DNA,1.5 U的Taq聚合酶,双蒸水以补足20μL反应体系。验证性试验结果表明该反应体系有一定通用性,但扩增效果及PCR产量有差异。