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Wnt/β-catenin信号通路在大鼠BMSCs神经分化中的作用研究

何丁文  殷明  邬亚华  周荣平  魏强强  殷嫦嫦  
【摘要】:目的:研究Wnt/β-catenin信号通路在大鼠BMSCs神经分化中的作用,探讨应用EGF、bFGF诱导BMSCs神经分化的可能信号分子机制。方法采用全骨髓贴壁法体外分离纯化大鼠BMSCs。第3代BMSCs分别给予20ng/ml碱性成纤维生长因子(bFGF)和(或)20ng/ml表皮生长因子(EGF)在含10ml/L(1%)胎牛血清(FBS)的DMDM/F-12培养基中诱导,倒置相差显微镜观察其形态变化,免疫组织化学法检测细胞内神经元特异性烯醇化酶(NSE)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,RT-PCR检测其β-catenin、BDNF、GDNF、nestin基因mRNA的变化。结果诱导7d后bFGF和EGF+bFGF组细胞变圆,向四周伸出多个明显突起,部分突起间存在连接,而EGF组、空白组变化不明显;免疫组化染色示EGF组GFAP阳性率高于NSE,而bFGF和EGF+bFGF组NSE阳性率高于GFAP。EGF+bFGF组NSE、GFAP阳性率最高,bFGF组次之,与空白组、EGF组比较差异均有统计学意义(P0.004 2);RT-PCR示nestin在bFGF和EGF+bFGF组较其他组显著增高,差异均有统计学意义(P0.05);β-catenin、BDNF在EGF组、bFGF组、EGF+bFGF组显著高于空白组,且各组间比较差异均有统计学意义(P0.05);GDNF在bFGF组、EGF+bFGF组显著高于其他组,且bFGF组高于EGF+bFGF组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 bFGF、EGF可诱导大鼠BMSCs向神经细胞分化,分化过程中β-catenin、BDNF、GDNF基因表达增高,Wnt/β-catenin信号通路可能在BMSCs向神经分化过程中起重要作用。

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