收藏本站
收藏 | 投稿 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

AKT2基因短发夹结构RNA慢病毒载体的构建及鉴定

崔勇  陈静  王君玉  王麒  胡国汉  骆纯  卢亦成  
【摘要】:目的:构建丝/苏氨酸蛋白激酶2(AKT2)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体。方法:利用公用网站按照RNAi序列设计原则,设计RNAi靶点序列并合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经MluI和ClaI进行酶切后的PLVTHM载体连接产生shRNA慢病毒载体。应用shRNA慢病毒载体转染293T细胞及U87细胞,测定病毒滴度,流式细胞仪测定U87细胞的转染效率,PCR及Western blot鉴定AKT2基因在U87细胞中的下调作用。结果:成功构建了shRNA-AKT2慢病毒载体,经测序与设计合成的靶向链完全一致。荧光显微镜下观察293T细胞感染效率大于90%,病毒滴度为3.59×107TU/ml;流式细胞仪测定对AKT2细胞的转染效率为86.93%。PCR测定shRNA载体感染U87细胞后AKT2的干扰效率为68%。Western Blot结果显示该慢病毒载体对AKT2的表达有较为显著的敲减作用。结论:成功构建了人胶质瘤细胞株AKT2基因RNAi慢病毒载体,为后续的体内外功能学试验创造了条件。

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 黄纯海;李学军;罗勇;黄军;袁贤瑞;;人EGFL7基因短发夹结构RNA慢病毒载体的构建及鉴定[J];中华神经外科疾病研究杂志;2009年06期
2 栗超跃,惠国桢,郭礼和;RNA干扰:脑学习和记忆的可能机制[J];生理科学进展;2003年01期
3 孙剑;RNA干扰抗病毒感染[J];生物技术通讯;2004年01期
4 肖翠英,张思仲;RNA干扰研究的新进展[J];医学分子生物学杂志;2004年02期
5 孙成林,段志泉,冯宗承,辛世杰,古峻,张京红,张强;血管紧张素Ⅱ1型受体短发夹环RNA抑制其在哺乳动物细胞中的表达[J];中华实验外科杂志;2004年07期
6 苏畅;徐亚欧;马嵬;於建国;毛德才;;肌肉抑制素基因与RNA干扰的应用前景[J];西南民族大学学报(自然科学版);2005年S1期
7 鲁毅;李任峰;徐萍;王三虎;田献礼;;RNAi的抗病毒机制及应用[J];生命的化学;2011年04期
8 陈杰,白春学,张敏;RNA干扰技术在哺乳动物中的应用[J];生物化学与生物物理进展;2003年04期
9 伊正君,朱道银;RNA干扰作用的机制及应用[J];生物学通报;2003年05期
10 刘铁刚,张敏,邵荣光;依赖RNA的RNA聚合酶介导RNA干扰的扩增效应[J];生命的化学;2003年04期
11 吴镝,洪权,陈香美,傅博,李爱萍,刘航,王建中,白雪源;利用逆转录病毒RNAi载体抑制心肌成纤维细胞分泌纤维连接蛋白[J];中国科学C辑;2004年04期
12 马龙洋,刘家云,许彦鸣,贾林涛,王成济,杨安钢;针对增强型绿色荧光蛋白RNA干扰表达载体的构建和鉴定[J];第四军医大学学报;2005年08期
13 耿波;曹顶臣;孙效文;欧阳红生;;RNAi-基因沉默的分子机理[J];水产学杂志;2005年02期
14 田雪文;李秋艳;赵学峰;李云龙;;FZD2基因RNAi逆转录病毒载体的构建[J];山东医药;2006年04期
15 霍黉琦;李新平;曹志飞;李静;汪成富;;RNA干扰技术及其在细胞周期研究中的应用[J];生物学杂志;2006年02期
16 陈敏;祝怀平;凌斌;周颖;朱园园;高婷;程志祥;沈国栋;赵卫东;冯定庆;;C-erbB-2特异性siRNA逆转录病毒载体的构建与鉴定[J];临床输血与检验;2006年03期
17 叶礼红;舒晓春;邬伟民;鲁红云;孟晓军;孙辽;;TIEG特异的siRNA慢病毒载体的构建及鉴定[J];中国现代医学杂志;2009年17期
18 贾俊涛;陈立军;赵明秋;琚春梅;吕英然;陈金顶;;口蹄疫病毒VP1基因siRNA重组腺病毒的构建及其介导的RNAi抑制口蹄疫病毒复制的研究[J];中国兽医杂志;2010年01期
19 张旭;张树彪;金梅;;RNA干扰在植物中的应用[J];安徽农学通报(上半月刊);2011年07期
20 杨笑菡,王艳;RNA干扰的研究进展及应用[J];国外医学.生理.病理科学与临床分册;2003年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张辉;于力;朱龙英;万延慧;朱为民;;Hair-pin RNA介导的番茄抗TYLCV效果初步研究[A];庆祝中国园艺学会创建80周年暨第11次全国会员代表大会论文摘要集[C];2009年
2 李艳;严明;;RNA干扰[A];第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(下)[C];2004年
3 闫虎斌;陆智明;;基于RNA干扰的植物抗病毒育种原理及研究进展[A];中国柑橘科技创新与产业发展战略论坛暨中国柑橘学会2007年年会论文集[C];2007年
4 赵午莉;邵荣光;;MR-1基因在白血病K562细胞中的功能研究[A];2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2009年
5 陈始明;陶泽璋;肖伯奎;;RNA干扰hTERT基因抑制Hep-2细胞生长增殖的实验研究[A];湖北省抗癌协会头颈肿瘤专业委员会第四次学术会议资料汇编[C];2005年
6 潘燚;李伟雄;杨素清;曾子君;林映如;郭爱林;;siRNA抑制肺癌细胞DNA-PKcs的表达与放射敏感性的关系[A];中华医学会放射肿瘤治疗学分会六届二次暨中国抗癌协会肿瘤放疗专业委员会二届二次学术会议论文集[C];2009年
7 梁睿;罗庆;金先庆;;快速直视筛选结缔组织生长因子特异RNA干扰序列的研究[A];第八届全国儿童肿瘤学术会议论文汇编[C];2009年
8 韩之波;王晗;任贺;赵辉;刘拥军;韩忠朝;;RNA干扰沉默HIF-1α对人乳腺癌细胞功能的影响[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年
9 王子见;吴秀萍;邓洪宽;刘明远;;RNA干扰技术在动物寄生性线虫研究中的局限性[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会论文集[C];2009年
10 母连志;丁壮;丛彦龙;尹仁福;刘美;王昌庆;李少丽;邱蜜蜜;;靶向新城疫病毒P基因利用RNAi技术抑制其在鸡胚成纤维细胞上的复制[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(下册)[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李恭会;shRNA阻抑前列腺癌细胞雄激素受体和hTERT基因表达的研究[D];浙江大学;2005年
2 魏军民;RNA干扰逆转肿瘤多药耐药的实验研究[D];山东大学;2005年
3 王晓龙;小鼠骨骼肌细胞SelW基因的RNA干扰研究[D];东北林业大学;2006年
4 王静;转化生长因子-β1基因沉默对人涎腺粘液表皮样癌Ms细胞生物学行为的影响[D];第四军医大学;2006年
5 张守峰;狂犬病病毒的RNA干扰研究[D];吉林大学;2007年
6 王鹏雁;口蹄疫病毒干扰RNA转基因小鼠模型的构建[D];石河子大学;2008年
7 谭兵;RNA干扰在体外、体内抑制TNF-α表达的实验研究[D];广州医学院;2008年
8 倪勤;shRNA表达框的快速制备及其在抗HBV相关研究中的应用[D];浙江大学;2004年
9 杨捷琳;腺样囊性癌高低转移细胞株基因表达差异性及B7-1、XAGE-1b与转移相关性研究[D];复旦大学;2005年
10 李朝阳;RNA干扰下调cyclin T1蛋白的表达及其对靶细胞和HIV-1的影响[D];武汉大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 黄伟素;水稻穗颈伸长基因EU12的功能验证[D];浙江大学;2006年
2 贾勇圣;红霉素抑制成神经细胞瘤增殖机制的初步研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
3 姚津剑;针对P基因的siRNA对HBV表达影响的实验研究[D];华中科技大学;2007年
4 李涛;抑制乳腺癌耐药蛋白表达逆转肝细胞癌多药耐药[D];重庆医科大学;2009年
5 马耀华;马铃薯PTOM1基因全长cDNA的克隆及其RNAi转基因植株的构建[D];广西大学;2004年
6 王维锋;腺病毒介导的siRNA抑制hTERT增强肝癌化疗敏感性的实验研究[D];第二军医大学;2004年
7 吕青;RNA干扰抑制肿瘤细胞血管内皮生长因子的表达[D];北京中医药大学;2005年
8 杨德华;端粒酶亚单位的siRNA对肝癌的作用[D];华南师范大学;2005年
9 张勇;CLC3基因siRNA表达载体构建及对转染的胃癌细胞的增殖抑制作用[D];第四军医大学;2005年
10 涂宏钢;应用RNA干扰技术对新生隐球菌CNLAC1基因功能的初步研究[D];第二军医大学;2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 徐铮奎;RNA干扰剂即将浮出市面[N];医药经济报;2004年
2 余志平;打开功能基因组学与未来治疗学的大门[N];中国医药报;2004年
3 李彬;今年技术发展呈八大趋势[N];科技日报;2005年
4 记者 吴伟农;世界十大科技突破[N];新华每日电讯;2001年
5 本报记者 韦绍锋 邢少文 康义文 康义瑶(实习) 驻地记者 胡勇;生物医药“海归”之惑[N];医药经济报;2004年
6 胡永生;今年的热门技术[N];科技日报;2004年
7 曹丽君;RNA干扰技术取得突破[N];健康报;2004年
8 记者王艳红;让致病基因“沉默”[N];人民日报;2003年
9 记者 王艳红;致病基因可以“沉默”[N];新华每日电讯;2003年
10 记者 何德功 毛磊 宋心德;科学正在使基因为人类服务[N];新华每日电讯;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978