收藏本站
收藏 | 投稿 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

青鳉prdm14的原核表达、多克隆抗体制备及其应用

李玲玉  方健  于淼  陈天圣  
【摘要】:青鳉(Oryzias latipes)是研究遗传发育和细胞多能性的重要模式鱼类,为探究prdm14同源基因的潜在作用,实验将青鳉prmd14经原核表达后制备了兔抗Prdm14多克隆抗体。首先,将prdm14基因的部分编码区连接到p ET32a质粒中,构建重组表达载体p ET32a-prdm14?600。随后将重组载体转化至大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3),经异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,获得分子量为60 k D的Prdm14重组蛋白。接着大量诱导蛋白表达并切胶纯化,免疫家兔(Oryctolagus cuniculus),6周后获得阳性抗体,最后通过ELISA和Western blot检测抗体效价及其特异性。结果显示,在37℃、0.6 mmol/L IPTG、诱导3h的条件下,可获得Prdm14重组蛋白的高效表达;制备的兔抗青鳉Prdm14多克隆抗体能够特异性识别青鳉组织中表达的Prdm14蛋白以及在Hep G2细胞中过表达的青鳉Prdm14:EGFP融合蛋白。综上所述,研究首次制备了一种能有效识别青鳉Prdm14的多克隆抗体,该抗体的获得为后续研究prdm14基因在鱼类多能性干细胞中的作用提供了有力工具。

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 刘勇;付荣恕;任宗明;;2种有机磷农药联合胁迫下日本青鳉的逐级行为响应[J];环境科学;2010年05期
2 刘勇;张高生;陈琳琳;任宗明;付荣恕;王子健;赵建平;高占国;翁燕波;;2种除草剂联合胁迫下日本青鳉的逐级行为响应[J];生态毒理学报;2010年01期
3 张陆伟;蔡磊明;赵学平;刘新洋;;3种杀菌剂对日本青鳉的急性毒性研究[J];安徽农业科学;2012年36期
4 景体淞,徐镜波;硝基芳烃对青鳉鱼鳃腺苷三磷酸酶的抑制和构效分析[J];毒理学杂志;2005年S1期
5 易浪波;梅丹;刘小英;彭清静;;钒对日本青鳉的急性毒性及安全评价[J];吉首大学学报(自然科学版);2010年02期
6 刘腾腾;董晓晓;苗明升;付荣恕;;日本青鳉(Oryzias latipes)胚胎和卵黄期仔鱼对镉的敏感性[J];生态毒理学报;2012年02期
7 侯彦峰;张照斌;胡建英;;皮质醇影响青鳉鳃内钠钾ATP酶基因表达的研究[J];生态毒理学报;2009年02期
8 易浪波;梅丹;刘小英;马陶武;何齐庄;彭清静;;钒对日本青鳉的急性毒性及与镍·镉的毒性比较[J];安徽农业科学;2010年05期
9 黄乾生;陈亚檞;方超;康美;董四君;;盐度影响全氟辛烷磺酸对海水青鳉(Oryzias melastigma)的毒性[J];科学通报;2013年02期
10 王学霞;肖能文;闫春红;谢德燕;李俊生;;利用日本青鳉评估胜利油田水体毒性效应[J];环境科学研究;2011年09期
11 任宗明;李志良;饶凯锋;王子健;赵立庭;王鹏;王涛;;氰戊菊酯和氯化镉暴露下日本青鳉的行为反应差异[J];生态毒理学报;2008年06期
12 张丽俏;刘洋;曾阳;付秀娥;陈琳琳;任宗明;付荣恕;赵建平;翁燕波;;氯化镉、灭多威和硝基苯对日本青鳉(Oryzias latipes)行为抑制的生物应急监测[J];生态毒理学报;2011年02期
13 张陆伟;蔡磊明;赵学平;刘新洋;;3种杀菌剂对日本青鳉早期生命阶段毒性效应初步研究[J];环境科学学报;2013年10期
14 黄玉瑶;青鳉的生物学特性与饲养管理技术[J];动物学杂志;1988年06期
15 严大为;韩屴;汤保华;赵玉艳;蔡磊明;;三羟甲基丙烷对日本青鳉胚胎发育的毒性效应[J];农药;2011年06期
16 于彩虹;周珂;刘芸;刘畅;罗京;于广飞;;城镇污水处理厂进出水对日本青鳉早期阶段亚慢性毒性效应[J];生态毒理学报;2014年01期
17 杨明;王昆鹏;张玉颖;徐刚;吴明红;;青鳉DMY基因的克隆及其在性别鉴定中的应用[J];上海大学学报(自然科学版);2010年06期
18 任宗明;李志良;;高锰酸钾及氯化锰对日本青鳉的急、慢性毒性[J];生态毒理学报;2009年06期
19 叶婷;康美;黄乾生;董四君;;邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)和邻苯二甲酸单乙基己基酯(MEHP)长期暴露对海洋青鳉(Oryzias melastigma)内分泌干扰效应的评价[J];生态毒理学报;2014年02期
20 易梅生;洪旎;李振东;严彦;王丹科;赵浩斌;洪云汉;;青鳉干细胞及其应用[J];中国科学:生命科学;2010年02期
中国重要会议论文全文数据库 前5条
1 景体淞;徐镜波;;硝基芳烃对青鳉鱼鳃腺苷三磷酸酶的抑制和构效分析[A];中国毒理学会第四届全国学术会议论文(摘要)集[C];2005年
2 赵浩斌;王玉凤;曹梦西;杨玉慧;江文波;Yoshitaka Nagahama;;青鳉生殖细胞发育相关基因克隆与分析[A];中国鱼类学会2008学术研讨会论文摘要汇编[C];2008年
3 杨文川;王彦海;;福建淡水鱼青鳉腔槽绦虫新种记述[A];中国动物学会第七届全国青年寄生虫学工作者学术讨论会论文摘要集[C];2002年
4 陈国柱;林小涛;;农田生境入侵捕食者食蚊鱼对青鳉再引入种群的影响[A];中国海洋湖沼学会鱼类学分会、中国动物学会鱼类学分会2012年学术研讨会论文摘要汇编[C];2012年
5 赵久刚;周莉;金俊琰;桂建芳;;青鳉防御素OlBD的活性分析[A];中国海洋湖沼学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会论文摘要汇编[C];2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王洪盼;铜和镉对日本青鳉毒性效应研究[D];天津科技大学;2015年
2 佘冬莲;青鳉Pod1基因多克隆抗体的制备及表达分析[D];湖南师范大学;2016年
3 朱叶飞;青鳉性腺及脑miRNA鉴定[D];上海海洋大学;2016年
4 程娜娜;青鳉mep50的表达模式及其与prmt5相互作用的研究[D];华中师范大学;2014年
5 王赛男;不同分散剂对海水青鳉早期发育的毒性影响的比较研究[D];辽宁师范大学;2013年
6 付秀娥;农药及重金属连续暴露下日本青鳉行为变化的内在响应机制研究[D];山东师范大学;2012年
7 刘腾腾;镉对日本青鳉(Oryzias latipes)的毒性效应及其机制研究[D];山东师范大学;2012年
8 刘勇;环境污染物联合胁迫下水生生物行为响应研究[D];山东师范大学;2010年
9 张丽俏;基于日本青鳉急性毒性实验的水质监测技术构建[D];山东师范大学;2011年
10 马继铭;菲与烷基菲对海水青鳉早期发育阶段的毒性效应比较研究[D];大连海事大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 本报记者 欧阳光;水质好坏问青鳉[N];中国水利报;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978