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乳酸乳球菌NZ9000中增强型绿色荧光蛋白报告系统的构建

刘璐  艾连中  夏永军  熊智强  管彤  宋馨  
【摘要】:增强型绿色荧光蛋白(enhance green fluorescent protein,eGFP)基因是遗传操作系统中常用的报告基因,以eGFP为报告基因评价不同启动子在乳酸乳球菌(Lactococcus lactis) NZ9000中的调控能力,寻找能够高效表达外源蛋白的强启动子。以实验室构建的携带eGFP基因的pIB184-eGFP质粒为载体,PCR扩增来源于pLpCas9-0537、pMG36e、pNZ44的启动子P_(11)、P_(32)、P_(44),将其分别克隆至pIB184-eGFP上,构建基于eGFP的报告系统。酶标仪定量测定eGFP的表达强度,比较不同启动子的转录活性。结果表明,在乳酸乳球菌中启动子P11转录的活力十分微弱,启动子P_(23)、P_(32)、P_(44)的转录活性分别比P_(11)高约23. 9、7. 8、4. 1倍。该文利用基于eGFP的报告系统,筛选出适用于乳酸乳球菌中不同转录活性的启动子,为外源基因在乳酸乳球菌中的表达奠定了基础。

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