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多重RT-PCR MassARRAY技术检测27种呼吸道病原体方法的建立和临床应用评价

刘宏钱  宋朝晖  梁巧米  
【摘要】:目的建立一种可同时检测27种呼吸道病原体的多重逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)MassARRAY技术,并探讨其临床应用价值。方法针对呼吸道病原体设计扩增引物和延伸引物,并构建病原体标准质粒;按梯度稀释标准质粒,用于考察多重RT-PCR MassARRAY方法的灵敏度、特异性和重复性。分别采用建立的多重RT-PCR MassARRAY方法和实时RT-PCR方法检测207份呼吸道感染患者鼻咽拭子样本,比较2种方法的检测性能。结果建立的多重RT-PCR MassARRAY方法对29种病原体的最低检出限为1×101~1×103拷贝/μL,特异性高。207例鼻咽拭子样本中共检出57份阳性,阳性检出率为27.54%。细菌性病原体中检出率较高的是肺炎链球菌、卡他莫拉菌、肺炎支原体和流感嗜血杆菌;病毒性病原体阳性检出率较高的为副流感病毒、人偏肺病毒和甲型流感病毒。2种方法检测结果总符合率为99.03%,具有高度的一致性(kappa=0.98)。结论基于RT-PCR MassARRAY技术的27种呼吸道病原体检测方法具有较高的灵敏度和特异性,且操作简单,通量高,可以为临床呼吸道病原体感染的诊断提供实验室依据。

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