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青霉素酰化酶基因的克隆与表达——Ⅲ、温度在转录水平调控青霉素酰化酶基因表达

杨胜利  吴汝平  王镜新  何建森  张继宝  
【摘要】:高表达的基因工程菌大肠杆菌A56(pPA22)青霉素酰化酶基因表达对温度敏感。在37℃几乎不产生青霉素酰化酶,在28℃以下积累青霉素酰化酶,合成酶的最适温度为20—22五℃,产量可达250u/100ml。当用 DNA-RNA 点滴杂交法定量分析 RNA 时,发现在37℃培养的细胞中不积累青霉素酰化酶 mRNA,而22℃培养的细胞中相应 mRNA 的量是28℃培养的细胞中的5倍。同一质粒 pPA22上的氯霉素乙酰转移酶的 mRNA 在三种温度培养的细胞中的浓度相同。将37℃培养的细胞转移到22℃继续培养,当菌体不继续增殖时;细胞内仍无青霉素酰化酶及其 mRNA 的积累。上述结果表明温度在转录水平上专一地调控了青霉素酰化酶基因的表达,在37℃长时期培养的细胞中青霉素酰化酶基因被永久地关闭。

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