收藏本站
收藏 | 投稿 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

人血管内皮生长因子(VEGF_(165))在毕氏酵母中的表达及生物活性分析

马骊  王小宁  张智清  周小明  曾革非  陈爱君  
【摘要】:采用PCR扩增hVEGF165基因 ,经DNA序列分析后 ,插入含AOX1启动子和α分泌信号肽序列的Pichi apastoris酵母表达载体中 ,构建重组质粒 pPIC9K/hVEGF165,经转化酵母宿主菌KM 71,筛选多拷贝整合转化子 ,摇瓶培养 ,1%甲醇诱导表达。表达产物经Heparin SepharoseCL6B亲和层析纯化后 ,以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)测定其生物学活性。SDS PAGE分析显示 ,表达产物以可溶性分子形式存在于上清中 ,诱导 4天的表达量达上清总蛋白质的 6 0 %以上。Western印迹表明 ,表达产物具有良好的抗原性和特异性。经Heparin SepharoseCL6B亲和层析纯化 ,rhVEGF165的纯度可达到 90 %以上。体内、外生物学活性研究证实其具有刺激HUVEC增殖和促进肢体缺血性动物模型侧枝循环建立的功能

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 周正春;葛建军;陈兵;张胜权;汪学龙;;hVEGF165/pcDNA 3.1在小鼠心肌细胞中的表达[J];中国胸心血管外科临床杂志;2006年03期
2 陶思丰;陈力;施小宇;陈健;许远;李国刚;;聚四氟乙烯血管材料携带的血管内皮生长因子基因转染血管内皮细胞并促进其生长的可行性[J];中华实验外科杂志;2006年11期
3 李子健,金宁一,江文正,张应玖,张立树,孙兆增;人免疫缺陷病毒Ⅱ型(HIV-2)gag蛋白基因在毕赤酵母中的克隆表达[J];中国免疫学杂志;2003年02期
4 贾晓晶,刘丽,龚守良,刘树铮;血管内皮生长因子重组DNA的构建及体外表达[J];吉林大学学报(医学版);2002年01期
5 杨少丽;阎松;郑兰红;王征;林秀坤;;斑马鱼VEGF基因的siRNA表达载体构建、有效序列筛选及其对基因表达的干预性研究[J];生物物理学报;2007年05期
6 刘一平,杨晓,徐晓玲,邓继先,程萱,黄翠芬;SMAD4在嗜甲醇酵母中的表达及鉴定[J];生物化学与生物物理学报;2000年03期
7 胡箭,李元;人可溶性低密度脂蛋白受体在甲醇酵母中的表达[J];生物工程学报;2002年01期
8 黄向红;伍招娣;谭小军;;RNA干扰VEGF对体外JAR细胞生长的影响[J];生命科学研究;2007年01期
9 罗正良;严鹏科;;ILF3蛋白家族生理及功能调节[J];医学综述;2009年10期
10 方松刚;刘迪秋;李忠;邹桂伟;王光勇;田荣欢;;动物抗低氧胁迫相关基因的表达调控机制[J];中国生物工程杂志;2010年10期
11 于潇华;郭小芳;田智;粟敏;刘立鹏;;微核糖核酸对血管生成相关因子的调节作用[J];生命科学研究;2010年06期
12 郑亚宁;朱瑞娟;王多伟;魏莲;魏登邦;;高原鼢鼠血管内皮生长因子基因编码和mRNA的表达以及微血管密度:与其它鼠类的比较[J];生理学报;2011年02期
13 吴纬,陈静娴,宋宁,焦丽华;重组人Endostatin在甲醇酵母Pichia Pastoris中的分泌表达[J];四川大学学报(自然科学版);2002年S1期
14 王宏伟;曹明智;张金玉;张峥;王秀丽;葛银林;;抑制VEGF基因表达对大肠癌细胞HT-29的增殖影响[J];生命科学研究;2005年04期
15 胡箭,洪斌,李元;人高密度脂蛋白受体胞外片段在甲醇酵母中的表达[J];遗传学报;2003年01期
16 娄淑杰;杨川川;陈佩杰;;VEGF在运动诱导大鼠海马神经发生中可能的信号转导通路[J];解剖科学进展;2008年04期
17 李国栋;房学东;陈学博;宋燕;刘力华;段秀梅;谭岩;;血管内皮生长因子反义基因真核表达载体的构建及其对乳腺癌细胞的生长抑制作用[J];中国生物制品学杂志;2008年07期
18 王伟;曹东升;王帮河;丁浩;宁金龙;;腺病毒载体介导的VEGF_(165)基因治疗大鼠缺血皮瓣的实验研究[J];徐州医学院学报;2006年05期
19 赵鹏;路瑛丽;冯连世;徐建方;朱珂;;低氧训练对大鼠骨骼肌HIF-1α基因表达的影响[J];山东大学学报(理学版);2009年05期
20 聂东宋,李敏,徐辉明,何宁佳,梁宋平;重组虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ在巴氏毕赤酵母中的表达及纯化[J];生物工程学报;2002年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 周芳;汪运山;郏雁飞;胡安拉;马晓丽;张茂修;;三氧化二砷诱导胃癌细胞AGS的凋亡及对STAT3、VEGF表达的影响[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年
2 封巍;祝淑钗;郑晓;王玉祥;王准;王鑫;;阻断血管内皮生长因子表达对食管癌细胞放射敏感性的影响[A];2009年浙江省放射肿瘤治疗学学术年会论文汇编[C];2009年
3 贾军;杨世勇;张志明;;血管内皮生长因子在食管鳞癌中的表达及临床意义[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年
4 邢卫杰;李予;王文军;麦美琪;杨冬梓;张清学;;血管内皮生长因子对大鼠卵巢组织自体移植后的形态与功能的影响[A];第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编[C];2007年
5 赵永忠;王波;王天才;;血管内皮生长因子在实验性胆汁性肝硬化形成过程中的作用[A];第二届全国人工肝及血液净化学术年会论文集[C];2005年
6 陈文明;朱嘉芷;Soria J;Mirshahi M;;维生素D3对血管抑制新生作用的研究[A];第三届全国血液免疫学学术大会论文集[C];2003年
7 张清媛;康欣梅;赵文辉;;雌激素及其拮抗剂对乳腺癌血管内皮生长因子的转录调节作用[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年
8 赵康;麻柱;;血管内皮生长因子对哺乳动物生殖的影响[A];中国奶牛协会2007年会论文集(上册)[C];2007年
9 刘耀煌;方志军;方向明;朱慧星;方金峰;徐如意;周虹;;肝细胞癌患者血清VEGF和NO含量测定及其临床意义[A];湖北省暨武汉市微生物学会分析微生物专业委员会第十届第五次学术会议论文汇编[C];2008年
10 赵海燕;陈宝元;曹洁;冯靖;;间歇低氧对人脐静脉内皮细胞中血管内皮生长因子的影响[A];2008年中国睡眠研究会第五届学术年会论文摘要汇编[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李艳;糖尿病大鼠视网膜VEGF、PEDF表达与神经细胞及血—视网膜屏障损伤的研究[D];天津医科大学;2006年
2 李曦铭;基因重组hVEGF165腺相关病毒的构建及其在间充质干细胞和心肌细胞中的表达[D];天津医科大学;2006年
3 孔怡淳;氧诱导视网膜病变的发病机制研究[D];天津医科大学;2006年
4 陶波;喉癌前病变中医证候与iNOS和VEGF表达关系及金喉片治疗的研究[D];广州中医药大学;2006年
5 方秀统;BMP-2和VEGF-165双基因共转染大鼠骨髓基质干细胞体内成骨的实验研究[D];吉林大学;2006年
6 崔正军;腺病毒载体介导的反义VEGF_(165)基因治疗人皮肤恶性黑色素瘤的实验研究[D];四川大学;2004年
7 金雪瑛;Apigenin对人乳腺癌细胞VEGF表达的影响及相关作用通路[D];中国医科大学;2007年
8 杨宏辉;VEGF转染对骨髓间质干细胞及对粥样硬化动脉TFPI的影响[D];中南大学;2007年
9 李建峰;实验性脊髓空洞前状态形成机制的分子生物学研究[D];河北医科大学;2005年
10 王琦;正常胰腺和胰腺癌多层螺旋CT灌注成像的临床及实验研究[D];中国医科大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙智勇;Survivin在胆管癌中的表达及其与血管内皮生长因子的相互关系的研究[D];山东大学;2008年
2 周志林;重组共表达质粒pIRES-hVEGF_(121)cDNA/hBMP-4在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达及对其分化的影响[D];安徽医科大学;2008年
3 张晓;siRNA对人乳腺癌细胞MCF-7 VEGF基因表达的影响[D];青岛大学;2006年
4 高云波;通过RNA干扰技术抑制人非小细胞肺癌血管内皮生长因子基因表达的研究[D];华东师范大学;2006年
5 于海华;HIF-1α反义脱氧寡核苷酸对宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用及HIF-1α、VEGF表达的影响[D];大连医科大学;2007年
6 骆仙芳;保肺定喘汤对慢性阻塞性肺疾病大鼠气道重构干预作用的研究[D];浙江大学;2005年
7 冯建军;COX-2及VEGF在人膀胱移行细胞癌中的表达及意义[D];福建医科大学;2005年
8 冯青俐;肝细胞生长因子与急性冠脉综合征的相关性研究[D];郑州大学;2005年
9 王文栋;人子宫内膜癌中血管内皮生长因子和雌激素受体的表达及相关性探讨[D];山东大学;2005年
10 张辉;VEGF, PCNA蛋白表达与垂体腺瘤的生物学行为关系的研究[D];山东大学;2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 高原;吸烟会使人体基因表达异常[N];新华每日电讯;2010年
2 记者 李雪梅;酒精影响基因表达[N];人民日报;2006年
3 张忠霞;特制RNA轻推一下,就能“唤醒”基因[N];新华每日电讯;2007年
4 陈勇;基因表达有性别差异“对性下药”有望实现[N];医药经济报;2006年
5 张忠霞;美科学家利用RNA激活基因[N];医药经济报;2007年
6 记者 耿挺;脑是怎样发育的[N];上海科技报;2007年
7 海文;美找到激活基因新方法[N];中国医药报;2007年
8 记者 李含;诺奖得主引领学子探寻RNA微观世界[N];新清华;2007年
9 记者 操秀英姜海;美发现数百个控制女性生育基因[N];科技日报;2007年
10 刘洁;FDA接受默克新癌症治疗药物上市申请[N];医药经济报;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978