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人尿激肽原酶的纯化与鉴定

汪炬  洪岸  孙奋勇  谢秋玲  
【摘要】:采用两性离子胶体沉淀和乙醇沉淀相结合的粗提方法,经离子交换、疏水层析、亲和层析及凝胶过滤 4个步骤有效地将人尿激肽原酶(hk 1)粗提物纯化,比活提高了 175 5倍,总得率为 70 %.用以慈菇蛋白酶抑制剂为配体的亲和层析纯化hk 1,效果理想,整个工艺路线适合产业化生产.纯化产物在SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳上为单带,高压液相色谱(HPLC)上为单峰,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测得分子质量为 3345 0u,等电聚焦测得pI在 4 3附近,为含糖蛋白.同时测定了该酶的热稳定性和pH稳定性.纯化过程中同时分离得到另一种药用蛋白———人尿胰蛋白酶抑制剂(HUTI).

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