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上调肾组织intermedin表达抑制单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化

乔晞  赵宁  王利华  张瑞婧  韩伟霞  
【摘要】:目的观察上调肾组织intermedin(IMD)表达对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响。方法健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、UUO组、IMD+UUO组、空质粒+UUO组。IMD+UUO组和空质粒+UUO组在输尿管结扎前分别将IMD-pc DNA3.1真核表达质粒和空质粒转入肾组织,real-time RT-PCR及免疫组化法检测转染效率。各组分别于术后7 d、14 d留取梗阻侧肾组织。HE、Masson染色观察肾组织病理变化;real-time RT-PCR检测肾组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤连蛋白(Fn1)的mRNA表达;Western印迹法检测Fn1的蛋白表达;免疫组化法检测TGF-β1的蛋白表达。结果与假手术组相比,UUO组肾脏出现明显的病理改变,肾间质纤维化程度随梗阻时间延长加重(与假手术组比较,7 d,t=11.927,P=0.0003;14 d,t=8.891,P=0.0009);IMD+UUO组肾脏病理改变及肾间质纤维化程度较同时间点UUO组明显减轻(7 d,t=3.892,P=0.018;14 d,t=4.047,P=0.016),而空质粒+UUO组与UUO组无显著差别(7 d,t=0.562,P=0.604;14 d,t=0.035,P=0.974)。与同时间点假手术组相比,UUO组TGF-β1、Fn1的表达明显升高(TGF-β1 mRNA水平7 d,t=4.432,P=0.011;14 d,t=4.873,P=0.006;蛋白质水平7 d,t=5.312,P=0.006;14 d,t=4.482,P=0.011;Fn1 mRNA水平7 d,t=6.053,P=0.004;14 d,t=7.345,P=0.002;蛋白质水平7 d,t=8.791,P=0.009;14 d t=8.027,P=0.001);转染IMD质粒后Fn1的表达较同时间点UUO组明显下降(mRNA水平7 d,t=3.103,P=0.036;14 d,t=2.913,P=0.044;蛋白质水平7 d,t=2.955,P=0.042;14 d,t=2.991,P=0.040);而转染空质粒后Fn1的表达无明显变化(mRNA水平7 d,t=0.095,P=0.929;14 d,t=0.158,P=0.882;蛋白质水平7 d,t=0.159,P=0.881;14 d,t=0.170,P=0.874)。转染IMD和空质粒对TGF-β1的表达均无明显影响(转染IMD质粒mRNA水平7 d,t=0.176,P=0.869;14 d,t=0.126,P=0.906;蛋白质水平7 d,t=0.198,P=0.853;14 d,t=0.196,P=0.854;转染空质粒mRNA水平7 d,t=0.100,P=0.925;14 d,t=0.097,P=0.928;蛋白质水平7 d,t=0.042,P=0.968;14 d,t=0.060,P=0.955)。结论上调肾组织IMD的表达能明显减轻肾间质纤维化,但其作用不是通过直接抑制TGF-β1的表达实现的。

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