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透明颤菌血红蛋白(VHb)基因合成及原核生物中的效应

熊爱生  彭日荷  陈建民  李贤  姚泉洪  
【摘要】:以“连续延伸 PCR基因合成法”(姚泉洪 1999) ,按植物偏爱密码子 ,合成了全长4 4 1bp的透明颤菌血红蛋白 (Vitreoscilla hemoglobin VHb)基因。此方法不需用连接酶 ,而用高保真 DNA聚合酶 pwo及 7个长度为 90 bp左右的长寡核苷酸引物 ,经一次 PCR反应即完成了全长为 4 4 1bp基因合成。 PCR产物经 Bam HI和 Sac I酶切 ,克隆入 p Bluescript载体 ,合成的 VHb基因经克隆和测序证实与设计一致。与报道的 VHb基因相比 ,核苷酸改动了 98个。G+C含量由原来的 4 5.3%提高到 4 7.8%。将该基因克隆入庆大霉素抗性基因启动子后 ,构建表达载体 p YP2 0 0 1h(VHbp)。将其转入大肠杆菌菌株 DH5α,在氧胁迫、缺乏、充足等三种情况下 ,绘制其生长曲线 ,探讨了合成 VHb基因在原核生物中的效应。结果显示 ,合成的 VHb基因在氧胁迫条件下能加快细菌的生长 ,增加产量

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