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盐霉素对乳腺癌干细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制

曹露  吴开祥  张亚  孙雯雯  杨会  张树鹏  
【摘要】:目的 探讨盐霉素对乳腺癌干细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法 体外培养MCF-7细胞形成微球体,取第3代微球体细胞,分别加入CD44-FITC、CD24-PE,采用流式细胞术检测乳腺癌干细胞百分比。取第3代微球体细胞,分别给予0、0. 5、2、5、7、9μmol/L盐霉素干预12、24、48 h,采用MTT法检测乳腺癌干细胞盐霉素干预后细胞活性;取第3代微球体细胞,分别给予0、2. 5、5、9μmol/L盐霉素干预24 h,倒置相差显微镜下观察乳腺癌干细胞形态学变化;取第3代微球体细胞,分别给予0、2、5、9μmol/L盐霉素干预24 h,分别采用FITC-Annexin V/PI双染法、PI单染法检测乳腺癌干细胞凋亡率和细胞周期;取第3代微球体细胞,分别给予0、0. 5、2、5、9μmol/L盐霉素干预24 h,采用Western blotting法检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9、PARP、β-catenin、Survivin、Bcl-2、Bax表达。结果 经流式细胞仪鉴定,在悬浮微球细胞中CD44+/CD24-/low表型的乳腺癌干细胞比例为(87. 0±0. 4)%,在MCF-7细胞中为(40. 1±1. 0)%,二者比较P0. 05。不同浓度盐霉素均能抑制乳腺癌干细胞存活,并且其抑制作用呈时间和浓度依赖性(P均0. 05)。倒置相差显微镜下观察,盐霉素干预后乳腺癌微球体逐渐解聚,密度降低,细胞大小不一、极度不规则,肿瘤细胞内部出现颗粒,细胞出现水肿、固缩,细胞碎片产生,并且随着盐霉素浓度升高,凋亡现象越来越明显。随着盐霉素浓度升高,乳腺癌干细胞凋亡率逐渐升高,并且在凋亡过程中可能伴G2/M期阻滞(P均0. 05)。随着盐霉素浓度升高,乳腺癌干细胞Caspase-3、Caspase-9、PARP活性片段以及Bax表达逐渐升高,而β-catenin、Survivin、Bcl-2表达逐渐降低(P均0. 05)。结论 盐霉素能够抑制乳腺癌干细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制β-catenin-Survivin-Caspase-3通路和干扰Wnt信号通路活性有关。

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