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绿色荧光蛋白与荧光素酶双标记肝癌细胞的构建及其在小鼠模型中的应用

胡倩榕  庞能智  周羽佳  李文丽  杨丽丽  
【摘要】:目的 构建绿色荧光蛋白(GFP)与萤火虫荧光素酶(FLuc)双标记的人肝癌HepG2细胞株(HepG2-GL),并应用于小鼠模型与活体生物发光成像。方法 通过慢病毒感染、嘌呤霉素筛选、流式细胞分选和单克隆扩增构建HepG2-GL细胞株,并将其接种至BALB/c裸鼠皮下或静脉内,建立皮下移植瘤模型与血行性转移瘤模型,应用小动物活体成像系统示踪肿瘤。结果 荧光显微镜下可观察到80%以上的HepG2-GL细胞发出绿色荧光;荧光素酶检测实验中HepG2-GL组的平均发光强度为3.2×10~4counts/s,远高于HepG2组,差异有统计学意义(t=65.99,P0.05);HepG2-GL细胞接种至小鼠皮下28 d后增殖形成体积达274或690 mm3的肿瘤块,接种至小鼠静脉内16 d后转移定植于小鼠肺、骨和头颈部;两类肿瘤模型小鼠在观察终点的活体生物发光信号均较接种肿瘤后当天明显增强,且信号强弱分布情况与HepG2-GL细胞在小鼠体内的空间分布密切相关。结论 成功构建HepG2-GL细胞株并应用于小鼠模型,活体生物发光成像可实现对肿瘤生长与转移的良好监测。

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