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登革病毒3型病毒样颗粒在酵母体内的表达与鉴定

付春云  方丹云  刘岩  喻治准  江汉宁  江丽芳  周俊梅  
【摘要】:目的探讨登革病毒3型病毒样颗粒(DENV3-VLPs)的免疫原性。方法用PCR法扩增登革病毒3型prME基因,插入载体pGAPZaA构建重组质粒pGAPZaA-prME-D3,将其转化毕赤酵母X33构建转化子pGAPZaA-prME-D3/X33。对转化子表达上清和细胞裂解液进行SDS-PAGE和Western blotting分析。用蔗糖密度梯度离心纯化表达的DENV3-VLPs并进行鉴定和电镜观察。结果成功构建重组载体pGAPZaA-prME-D3,获得酵母转化子pGAPZaA-prME-D3/X33,并应用毕赤酵母表达了DENV3-VLPs,表达蛋白约50000Mr,电镜观察VLPs直径为20~50nm。结论应用酵母表达系统成功表达了DENV-3VLPs,经鉴定表明其具有免疫反应性,为后续免疫原性研究及四价登革VLPs疫苗的构建奠定了基础。

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