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细粒棘球蚴Eg95全长基因的克隆与在甲醇酵母中的表达

胡旭初  徐劲  陆家海  陈守义  余新炳  
【摘要】:目的了解我国新疆细粒棘球绦虫表膜蛋白Eg95的全长基因结构及尝试其在甲醇酵母中表达。方法PCR从细粒棘球蚴头节DNA中扩增含有全长编码区序列(cds)的基因,克隆到T载体中测序。再亚克隆到pMETαA中,构建不带6个组氨酸标签的重组质粒,转化甲醇酵母,分析Eg95全长基因的表达。结果成功扩增了细粒棘球蚴绦虫1262bp的Eg95全长基因,含有两个内含子,外显子核苷酸序列与Genbank中细粒棘球绦虫Eg95 cds完全一致,但扩增的基因与已知的其他Eg95全长基因存在差别。1μg重组质粒的表达盒转化甲醇酵母PMD16,获得了Eg95基因重组工程酵母10个,其中非同源重组子3个。甲醇诱导非同源重组酵母特异表达出了分子量约为17kDa与Eg95cds编码蛋白接近的蛋白。酵母培养上清SDS-PAGE未见该蛋白条带出现,表达的蛋白可能主要位于酵母表面。结论克隆到Eg95属于—个基因家族的成员之一,其基因编码区高度保守,含有内含子的全长基因同样可在酵母中进行表达。

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1 杨红;突变型hGM-CSF基因的克隆及其在甲醇酵母(pichia pastoris)中表达的研究[D];重庆大学;2003年
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