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miR-367-3p靶向RGS17对HL-60细胞增殖和侵袭及凋亡的作用机制

王兆建  冶秀兰  张玉  
【摘要】:目的探讨微小RNA367-3p(miR-367-3p)对白血病细胞HL-60增殖、侵袭和凋亡的作用及相关机制。方法采用LipofectamineTM3000将miR-367-3p mimic、mimic NC、miR-367-3p+pcDNA3.1、miR-367-3p+pcDNA3.1-G蛋白信号传导的调节蛋白(RGS)17分别转染HL-60细胞,作为miR-367-3p过表达组、NC组、miR-367-3p+pcDNA3.1组和miR-367-3p+pcDNA3.1-RGS17组,对照组不作任何处理。qRT-PCR实验检测人正常单核细胞SC和HL-60中miR-367-3p的表达水平以及RGS17mRNA的表达水平,MTT实验检测各组细胞增殖,流式细胞仪检测各组细胞凋亡以及细胞周期,Transwell检测各组细胞侵袭能力,双荧光素酶实验验证miR-367-3p和RGS17靶向关系,蛋白质印迹法检测各组细胞RGS17、Cleaved-Caspase-3、Survivin、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶(p-AKT)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)蛋白表达水平。结果人正常单核SC细胞中miR-367-3p表达量为1.01±0.04,RGS17mRNA表达量为0.36±0.02;HL-60细胞中miR-367-3p表达量为0.36±0.06,RGS17mRNA表达量为0.96±0.04;与SC细胞比,HL-60细胞中miR-367-3p表达量下降(t=15.337,P0.001),RGS17mRNA表达量升高(t=25.456,P0.001)。与对照组和NC组比较,miR-367-3p过表达组24、48和72h细胞光密度值下降,F值分别为375.874、284.645和77.849,均P0.001。对照组、NC组、miR-367-3p过表达组细胞凋亡率分别为(4.38±0.56)%、(4.21±0.86)%和(12.57±1.07)%,Cleaved-Caspase-3蛋白表达量分别为0.30±0.03、0.33±0.03和1.61±0.08,Survivin蛋白表达量分别为0.96±0.07、0.94±0.06和0.14±0.02;3组间凋亡率及蛋白表达量差异有统计学意义,F值分别为93.475、671.080和232.506,均P0.001。上述各组细胞G1期比例分别为(52.56±2.01)%、(50.02±1.45)%和(82.56±1.45)%,G2期比例分别为(17.68±1.64)%、(19.14±2.28)%和(7.46±1.03)%,S期比例分别为(29.76±3.53)%、(30.84±2.55)%和(9.98±2.47)%;组间G1、G2和S期比例差异有统计学意义,F值分别为357.990、40.703和49.578,均P0.001。各组细胞穿膜数目分别为59.33±7.51、65.33±7.51和25.33±4.04,组间细胞穿膜数目差异有统计学意义,F=32.465,P=0.001。与对照组和NC组比,miR-367-3p过表达组细胞侵袭能力下降,细胞凋亡率升高,细胞在G1期的比例升高,G2和S期的比例下降,Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平升高,Survivin、p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达水平下降,均P0.05。双荧光素酶实验结果显示,miR-367-3p靶向RGS17。蛋白质印迹结果显示,与对照和NC组比较,miR-367-3p过表达组RGS17蛋白表达水平下降。与miR-367-3p+pcDNA3.1组比较,过表达RGS17可逆转miR-367-3p对HL-60细胞增殖、侵袭的抑制和促进细胞凋亡的作用。结论 miR-367-3p靶向RGS17抑制HL-60细胞增殖和侵袭并促凋亡,其可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路实现。

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