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PMA诱导Hela细胞ROS升高机制研究

李树林  王超  安雅男  李燕  王雪艳  唐旭东  于录  
【摘要】:目的活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)升高是癌症转移的主要原因之一,ROS已成为一种新的抗癌靶点,但其形成机制尚未完全阐明。本研究以佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)诱导Hela细胞ROS升高为模型,探讨Hela细胞ROS升高的相关机制。方法 500ng/mL的PMA诱导Hela细胞0.5h,荧光酶标仪检测Hela细胞经过PMA诱导后的ROS产量,蛋白质印迹法检测Hela细胞经过PMA诱导后的HIF-1α、Rac2和NOX2蛋白的表达量。结果 500ng/mL PMA诱导Hela细胞0.5、1、2和4h,与空白对照组比较,P值分别为0.001、0.055、0.125和0.135,表明0.5h为PMA诱导Hela细胞ROS升高的最佳诱导条件。500ng/mL PMA诱导Hela细胞0.5h后,诱导组中HIF-1α、Rac2和NOX2蛋白条带灰度平均值分别为15 833.33±63.13、20 448.33±78.65和21 840.33±123.91,均高于空白组的9 853.33±124.13、9 782.00±93.62和10 638.33±106.57,均P0.001,表明PMA诱导了HIF-1α、Rac2和NOX2蛋白的高表达。荧光酶标仪检测Hela细胞ROS结果显示,echinomycin组、NSC23766组和DPI组与PMA组比较,P值分别为0.001、0.003和0.001,表明HIF-1α、Rac2和NOX2抑制剂均抑制了Hela细胞中PMA诱导的ROS升高。蛋白质印迹法检测结果显示,空白组HIF-1α、Rac2和NOX2灰度平均值分别为13 571.00±287.68、10 495.67±253.72和17 403.33±162.87,PMA组分别为22 946.33±67.10、30 578.67±251.11和30 582.00±88.39,NSC23766组分别为22 629.67±445.26、3 919.00±41.68和22 618.67±161.51,echinomycin组分别为16 691.33±9.504、15 424.00±315.05和14 899.00±71.55,DPI组分别为22 970.00±714.88、30 120.33±555.05和5 787.00±12.29。echinomycin组与PMA组比较,均P0.001,表明echinomycin抑制了PMA诱导的HIF-1α、Rac2和NOX2蛋白的高表达;NSC23766组与PMA组比较,P值分别为0.354、0.001和0.001,表明NSC23766抑制了PMA诱导的Rac2和NOX2蛋白的高表达,但没有抑制HIF-1α蛋白的高表达;DPI组与PMA组比较,P值分别为0.944、0.117和0.001,表明DPI抑制了PMA诱导的NOX2蛋白的高表达,但没有抑制HIF-1α和Rac2蛋白的高表达。结论 PMA能引起Hela细胞ROS升高,该现象依赖HIF-1α/Rac2/NOX2途径。这可能为阐明与ROS升高相关的癌症转移分子机制、干预癌症转移的靶向治疗分子研究提供思路。

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