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重组猪轮状病毒VP7表达载体的构建与免疫原性分析

王红涛  王丕武  
【摘要】:猪轮状病毒(Porcine rotavirus, PoRV)是呼肠孤病毒科,轮状病毒属的成员,本属病毒在世界范围普遍流行,是流行广泛的人兽共患病。目前,研制安全有效的疫苗是控制轮状病毒感染的重要手段之一。本研究旨在对猪轮状病毒VP7蛋白在粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)的表达,并鉴定其免疫学特性。首先根据GenBank中发表的VP7全序列(NC_011503.2)设计引物,从含VP7的G-2质粒中扩增目的片段,建立融合表达载体pESP-2-VP7的重组酵母工程菌。异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-Dthiogalactoside, IPTG)可诱导表达谷胱甘肽S转移酶(glutathione-S-transferase, GST)-VP7融合蛋白,后将发酵工艺条件优化后的融合蛋白GST-VP7分离纯化并免疫小鼠(Mus musculus),进行免疫原性的分析。结果显示,克隆的VP7基因与预计的糖蛋白基因大小一致,并在酵母菌中表达了分子质量约61 k D重组蛋白,再经发酵工艺条件优化后,获得蛋白浓度达0.99 mg/mL。小鼠免疫的实验结果表明,免疫2周后,滴鼻组(in the nasal drip, IN)和肌注组(intramuscular injection, IM)的小鼠免疫球蛋白G (immunoglobulin G, IgG)抗体几何平均滴度分别达到680和495,滴鼻组分泌型免疫球蛋白A (secretory immunoglobulin A,SIgA)平均几何滴度达到43.5,可以产生高水平的γ-干扰素(γ-interferon, IFN-γ),表明了VP7蛋白免疫对诱导机体产生细胞免疫有一定的效果。本研究对VP7蛋白的真核表达和该蛋白的后续研究提供了条件;该蛋白免疫原性的研究为轮状病毒诊断抗原及相关疫苗的探索提供了基础资料。

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