Reg Ⅳ基因缺失CRD结构域片段获得及其表达载体的构建与转染

【摘要】：目的:探讨应用基因重叠延伸拼接PCR(SOE-PCR)技术构建Reg Ⅳ基因缺失CRD结构域表达载体,并转染Reg Ⅳ低表达结直肠癌细胞系。方法:应用SOE-PCR法获得Reg Ⅳ缺失CRD结构域片段,构建真核表达载体并转染Reg Ⅳ低表达结直肠癌LoVo细胞,G418筛选,RT-PCR检测鉴定。结果:经酶切鉴定筛选出的重组体测序结果与目的序列完全一致,重组载体构建成功,经pcDNA3.1-Reg Ⅳ-dom ain△转染的LoVo细胞Reg Ⅳ-dom ain△呈阳性表达。结论:利用SOE-PCR技术可成功构建Reg Ⅳ基因缺失CRD结构域的表达载体。