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抗重组幽门螺杆菌VacA单克隆抗体的制备

张绍兰  杨致邦  毛小琴  田一玲  黄进  邓颖  
【摘要】:目的制备抗重组幽门螺杆菌致细胞空泡毒素抗原(VacA)的单克隆抗体(mAb)。方法用基因工程菌pQE30-v-DH5α大量表达重组蛋白VacA,经Ni2+-NTA树脂纯化后,Western blot鉴定抗原性,免疫家兔后ELISA法检测血清VacA抗体鉴定其免疫原性。用重组VacA免疫Balb/c小鼠。取免疫鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合,HAT选择性培养和间接ELISA进行筛选,并检测所分泌抗体的效价和分析Ig类别。结果获得4株能稳定分泌VacA mAb的杂交瘤细胞,能分泌IgG2b、IgM和IgG1 3类抗体,轻链均为κ型。其中,IgG1 mAb经Western blot鉴定能与重组VacA发生特异性反应。结论应用纯化的重组VacA,成功获得了能稳定分泌幽门螺杆菌VacA单克隆抗体的杂交瘤细胞,并制备了单克隆抗体。为进一步研制检测VacA的试剂盒及探讨VacA的致病机制奠定了基础。

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