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靶向人VEGF165的SiRNA慢病毒的构建和鉴定

刘蓓  马戈甲  宋保强  
【摘要】:目的:构建靶向VEGF基因的SiRNA慢病毒载体,并包装病毒。方法:针对已经筛选确定的SiRNA有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,经双酶切后与PGC SIL-GFP慢病毒载体连接,构建慢病毒载体PGCSIL-SiVEGF,以293T细胞包装得到干扰病毒LV-SiVEGF,根据细胞表达绿色荧光蛋白水平计算病毒滴度;病毒感染人脐静脉内皮细胞HUVEC,通过定量RT-PCR检测VEGF的mRNA表达。结果:测序结果表明,靶向人VEGF的SiRNA慢病毒载体构建成功,包装后的慢病毒滴度为2×109 ifu/μl;感染HUVEC细胞后,实验组和对照组相比VEGF mRNA表达水平显著降低。结论:成功构建人VEGF SiRNA慢病毒LV-SiVEGF。

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