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酿酒酵母金属硫蛋白的表达、纯化及活性检测

梁晓峰  龚映雪  肖文娟  胡佳  郑阳阳  张小洪  王峻梅  刘泽寰  
【摘要】:通过PCR从酿酒酵母基因组DNA上扩增得到酿酒酵母基因CUP1编码的金属硫蛋白序列.将其编码序列克隆到质粒pTWIN1构建重组表达质粒pTWIN1-MT,转化大肠杆菌感受态细胞ER2566.重组融合蛋白CBD-intein1-MT在IPTG的诱导下得到表达,经SDS-PAGE和蛋白质印迹鉴定.用重组菌分别进行铜离子耐受性和吸收等实验,结果表明金属硫蛋白的表达增加了重组菌对铜离子的耐受性和积累量.用chitin亲和层析纯化重组蛋白,并由intein介导融合蛋白的自裂解.SDS-PAGE分析,纯化后的金属硫蛋白的纯度达到95%.纯化后的MT显示出很好的清除羟自由基的能力.

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