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果糖氨基酸氧化酶的原核表达及在糖化血红蛋白检测中的初步应用

李礼  姜旭淦  吴亮  鞠爱萍  沈进  陈盛霞  
【摘要】:目的原核表达果糖氨基酸氧化酶(FAOX),建立检测糖化血红蛋白A1c(HbA1c)的酶法并作初步评价。方法构建重组质粒pET32a(+)/FAOX,转化大肠埃希菌Rosetta(DE3),获得重组FAOX;以糖基化六肽为底物检测酶活性;初步建立检测HbA1c的酶法并进行方法学评价。结果重组FAOX在Rosetta(DE3)中高效表达,SDS-PAGE电泳分析显示其相对分子质量(Mr)约65 000;酶比活性为22 U/mg;建立的检测HbA1c酶法的批内、批间、日间CV均5%;低值(5.1%)和高值(15.8%)HbA1c的回收率分别为98.1%和98.9%;总胆红素(220μmol/L)、三酰甘油(10.8 mmol/L)和维生素C(500 mg/L)对酶法检测HbA1c无影响;与HPLC法和HA-8160型全自动糖化血红蛋白仪测定结果进行比较,相关系数分别为0.977和0.993。结论 FAOX可在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中高效表达,用其建立的检测HbA1c的酶法可满足临床对HbA1c测定的要求。

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