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一种基于报告基因体系的拟南芥非寄主抗性突变体的筛选方法

陈华民  潘俊松  赵秀香  周俭民  蔡润  
【摘要】:植物生长的环境中存在着许许多多的病原微生物,但任何一个物种都仅仅对有限数量的病原微生物表现出感病性,而对大多数的病原微生物表现出抗性.这种对绝大多数病原微生物的广谱抗性被称作非寄主抗性.迄今为止,对于非寄主抗性的机制和信号传导过程还知之甚少.本文介绍了一种筛选拟南芥非寄主抗性突变体的简单方法.在突变体的初筛过程中利用融合了萤火虫荧光素酶基因(LUC)的RAP2.6启动子报告系统来代替冗长的细菌生长测定实验.报告基因RAP2.6-LUC通常可以被毒性细菌Pseudomonas syringae pv tomato强烈诱导,但不能被非寄主细菌病原物P.syringae pv phaseolicola所诱导.用P.syringae pv phaseolicola接种RAP2.6-LUC的转基因植物后,从中筛选具有较高LUC活性的植株.通过这种筛选方法我们分离到了4个对非寄主细菌病原物P.syringae pv phaseolicola刺激表现出强烈报告基因活性的突变体.ebs1(enhanced bacteria susceptibility),ebs2,ebs3和ebs4丧失了或者部分丧失了对P.syringae pv phaseolicola和/或对P.syringae pv tomato的抗性.此外,ebs4还对低浓度的非亲和病原微生物P.syringae pv tomato(avrB)表现出了增强的超敏反应.筛选结果表明这个方法适合于大批量筛选非寄主抗性的突变体.

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