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棉卷叶野螟泛素基因的克隆、序列分析及原核表达

张宇宏  林同  张琪  常润磊  温秀军  
【摘要】:本研究用RT-PCR方法,克隆了棉卷叶野螟Haritalodes derogata(Fabricius)泛素基因编码区,GenBank登录号为 EU580145。序列分析表明,该编码区长228 bp,编码76个氨基酸,推测的编码蛋白的相对分子质量和等电点分别为 8.53 kD和5.83。同源性比较发现,棉卷叶野螟泛素基因与其他10种昆虫泛素基因在氨基酸水平上具有93 %以上的相似性。系统发育树显示棉卷叶野螟与斜纹夜蛾Spodopteralitura(Fabricius)遗传距离较近,通过同源建模获得了该棉卷叶野螟基因编码蛋白的理论三维结构。将棉卷叶野螟泛素基因与pET-32a(+)连接,构建原核表达载体 pET-32a-ub,经IPTG诱导,棉卷叶野螟泛素基因在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达。本研究成功克隆了棉卷叶野螟泛素基因的编码区,并经Western blotting分析证明实现了该基因的原核表达,为进一步研究其在该昆虫体内的作用机理奠定了基础。

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