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野桑蚕卵黄原蛋白的鉴定及cDNA序列分析

董胜张  刘朝良  汪泰初  朱保建  
【摘要】:利用SDS_PAGE和Westernblot方法分析鉴定了野桑蚕BombyxmandarinaMoore卵黄原蛋白 ,发现该蛋白由大小两个亚基组成 ,分子量分别为 175kD和 4 2kD。利用昆虫卵黄原蛋白进化上的保守性 ,根据家蚕的卵黄原蛋白cDNA序列设计特异性引物在野桑蚕的总RNA进行RT_PCR扩增 ,对于 3′和 5′端进行RACE扩增 ,解析获得了野桑蚕卵黄原蛋白cDNA全序列 (GenBank登录号AY30 996 7)。该序列含有 5 75 4个碱基 ,由一个开放阅读框组成 ,编码 1780个氨基酸 ,卵黄原蛋白的氨基酸序列与家蚕的同源性达到 97 6 %。在特定的酶切位点 (RSRR)处 ,即第 36 4~ 36 7个氨基酸位置 ,卵黄原蛋白前体被酶切为大小两个亚基 ,根据氨基酸推算的相对分子质量分别为 16 1 5 71kD和 4 0 794kD ,如果考虑到翻译后的修饰 ,这与SDS_PAGE的结果是吻合的。同源性分析表明 ,昆虫卵黄原蛋白一级结构分化基本上局限在同一目内 ,具有较高的保守性

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