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热补针法对类风湿关节炎寒证家兔模型膝关节滑膜组织TLR4-MyD88-ERK1/2信号通路的影响

苏成红  杜小正  方晓丽  刘强  刘莉梅  袁博  井维尧  张小娜  宋亚文  
【摘要】:目的 探讨热补针法治疗类风湿关节炎(RA)寒证的抗炎机制。方法 采用卵蛋白干粉、弗氏完全佐剂联合低温冷冻法制备RA寒证家兔模型。按随机数字表法将50只家兔(雌雄各半)随机分为正常组、模型组、瑞沙托维(TAK-242)组、热补针法组及脂多糖(LPS)联合热补针法组,每组10只。TAK-242组腹腔注射Toll样受体4(TLR4)抑制剂TAK-242(0.75 mg/kg),热补针法组于“足三里”行热补针法针刺,LPS联合热补针法组行热补针法针刺合腹腔注射TLR4激动剂LPS(0.25 mg/kg)。连续治疗14 d后,比较各组家兔膝关节周径、皮肤温度;HE染色法观察家兔膝关节滑膜组织形态学;免疫组化法检测各组家兔膝关节滑膜组织中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)表达水平;Western blotting法检测各组家兔膝关节滑膜组织TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、丝裂原活化蛋白激酶1/2(ERK1/2)的蛋白表达水平;实时荧光PCR检测各组家兔哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)mRNA的表达。结果 与模型组比较,各干预组家兔膝关节周径缩小、皮肤温度升高(P0.01);HE染色法示,TAK-242组及热补针法组家兔膝关节关节囊内侧黏膜基本平整,血管翳增殖减轻,存在少量炎性细胞浸润,而LPS联合热补针法组关节囊内侧黏膜粗糙,血管翳增殖,炎性细胞浸润聚集明显;滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-6平均光密度均降低(P0.01);TLR4、MyD88、ERK1/2蛋白表达水平及mTOR、p70S6K mRNA表达水平均降低(P0.01)。与LPS联合热补针法组比较,热补针法组及TAK-242组家兔膝关节周径缩小、皮肤温度升高(P0.01);滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-6平均光密度均降低(P0.01);TLR4、MyD88、ERK1/2蛋白表达水平及mTOR、p70S6K mRNA表达水平均降低(P0.01)。结论 热补针法可以有效改善RA寒证家兔模型膝关节肿胀,缓解炎症反应,其机制可能与抑制滑膜组织TLR4-MyD88-ERK1/2通路,拮抗细胞增殖活性,减少炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌有关。

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