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东部马脑炎病毒E2基因与GM-CSF共表达质粒的构建及其免疫原性初步研究

尉继征  林磊  熊伟  李佳明  杨保安  祝庆余  
【摘要】:目的:利用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)作为基因佐剂,提高东部马脑炎病毒E2基因重组质粒的免疫效果。方法:分别扩增E2基因与GM-CSF基因,连接进入含有内部核糖体插入位点(IRES)的真核表达载体中,构建共表达质粒。Lipofectamine2000介导转染真核细胞BHK-21,反转录PCR检测E2和GM-CSF两个基因的转录,Western印迹法和间接免疫荧光法(IFA)检测细胞内E2基因表达产物的抗原性。通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠,IFA法测定血清抗体效价,FACS测定免疫小鼠脾细胞中CD4+/CD8+淋巴细胞构成比,初步观察共表达质粒的免疫原性。结果:经酶切鉴定与序

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