收藏本站
收藏 | 投稿 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

H9N2亚型禽流感病毒NS1蛋白原核表达载体的构建及表达

马平  杨婧  刘宇卓  李银  黄欣梅  赵冬敏  韩凯凯  章丽娇  刘青涛  
【摘要】:为对H9N2亚型禽流感病毒(AIVs)NS1基因进行原核表达,并对表达产物进行抗原性分析,根据NS1基因合成1对特异性引物,进行PCR扩增,将扩增片段连接至PMD18-T载体,通过序列测定和比对筛选出保真基因克隆;将保真基因克隆至pET32a表达载体,构建重组质粒pET32a-NS1后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,加入IPTG进行诱导表达;并对IPTG使用浓度和诱导时间进行优化,对表达的重组蛋白用His-tag镍柱进行纯化,利用Western Blot和免疫荧光技术对纯化的重组蛋白进行鉴定及免疫原性的测定。结果显示,本试验成功扩增出H9N2 AIVs的NS1基因,并筛选到保真克隆;带有NS1保真基因的重组载体pET32a-NS1可在大肠杆菌中进行IPTG诱导表达,其中,IPTG最佳使用浓度为2 mmol/L、最佳诱导时间为8 h时表达量最大,并且表达产物主要存在于包涵体中;纯化后的重组蛋白可被抗His标签识别,利用重组蛋白制备的抗体可识别H9N2 AIVs在细胞内表达的NS1蛋白,说明重组蛋白具有良好的免疫原性,该试验为H9N2 AIVs NS1蛋白的功能特性和免疫学研究奠定了基础。

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前16条
1 陈丽;谢青梅;李少璃;王敬师;马静云;毕英佐;曹永长;;H9N2亚型禽流感病毒ns1基因的融合表达[J];华南农业大学学报;2006年02期
2 王方昆;袁秀芳;王一成;张存;徐丽华;刘思当;;H9N2亚型猪流感病毒NS1基因的克隆表达及反应原性分析[J];中国农业科学;2008年02期
3 董永军;王丽荣;贺会利;;H9N2亚型禽流感病毒NS1基因真核表达载体的构建及其在293细胞瞬时表达[J];中国兽医学报;2014年08期
4 孙进华,王君伟;禽流感病毒A/Chicken/Mudanjiang/0823/00(H9N2)株NS1基因的克隆及序列分析[J];中国预防兽医学报;2004年02期
5 李建丽;陈恩林;李和平;郝春丽;毕丁仁;王泽霖;;H9N2亚型禽流感病毒NS1基因的进化分析[J];病毒学报;2008年03期
6 王晶钰;刘红彦;李河林;张三东;柳超;温肖会;雷萌桐;;H9N2亚型禽流感病毒NS1基因的原核与真核表达[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2010年10期
7 董永军;王丽荣;王秋霞;贺会利;杭柏林;;鸡源禽流感H9N2亚型河南分离株NS1基因克隆、序列分析及原核表达[J];中国兽医学报;2014年09期
8 杨霞;陈少渠;李建丽;王川庆;王泽霖;;H9N2亚型禽流感病毒非结构蛋白基因NS1的表达及其单克隆抗体的研制[J];中国兽医学报;2011年09期
9 林东子;张志珍;梁念慈;;H9N2亚型禽流感病毒ns1基因克隆[J];广东医学;2006年12期
10 彭丽英;汪明;;猪日本乙型脑炎病毒NS1基因重组腺病毒的构建及表达[J];中国兽医科学;2007年07期
11 李红丽;闫巍文;王红宝;郭雪丽;张伟业;刘源;王志宇;;新城疫-H9N2亚型禽流感嵌合型病毒样颗粒免疫效果分析[J];黑龙江畜牧兽医;2020年12期
12 马凡舒;张蕾;王洋;胡博;吕爽;李欣彤;凌明玉;范思宁;张海玲;薛向红;廉士珍;闫喜军;;水貂阿留申病病毒NS1蛋白B细胞抗原表位的分析与鉴定[J];中国兽医科学;2016年02期
13 李红丽;闫巍文;王红宝;郭雪丽;张晋强;王志宇;王毅;;新城疫与H9N2亚型禽流感嵌合型病毒样颗粒的构建与鉴定[J];黑龙江畜牧兽医;2018年17期
14 鲁健;田科雄;;H9N2禽流感病毒研究进展[J];实用预防医学;2011年02期
15 郝永华;王芹;关武祥;修梅红;戴晓霞;郑峰;李伟红;刘峰;刘琴芝;李川;张全福;梁米芳;李德新;;抗登革病毒NS1单抗的制备及检测NS1方法的建立[J];病毒学报;2006年04期
16 何奇松;闭璟珊;李广平;文明;蒋先彪;秦建有;周庆安;熊毅;马琳;;竹鼠细小病毒NS1基因序列测定与分析[J];特产研究;2020年06期
中国重要会议论文全文数据库 前20条
1 陈素娟;朱寅彪;杨达;鞠勇;彭大新;刘秀梵;;H9N2亚型禽流感病毒不同长度NS1基因缺失病毒的构建及其免疫效力评价[A];第四届全国禽病分子生物技术青年工作者会议论文集[C];2015年
2 靳远;喻东;任洪广;殷志秋;黄志松;胡明达;李北平;周围;岳俊杰;梁龙;;中国禽流感H9N2的系统发生地理学分析[A];中国生物工程学会2014年学术年会暨全国生物技术大会论文集[C];2014年
3 孙敏华;董嘉文;李林林;袁建丰;邝瑞欢;张春红;郭鹏举;胡奇林;张建峰;;鹅细小病毒NS1蛋白的表达及ELISA方法的建立[A];第25届广东省科技进步活动月畜牧兽医学术与科技创新发展大会论文集[C];2016年
4 王泽霖;杨霞;陈少渠;李建丽;王川庆;;H9N2亚型禽流感病毒非结构蛋白基因NS1的表达及其单克隆抗体的研制[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
5 韩秀杰;赵凡凡;张保新;余风艳;沈红霞;王晓杜;;猪日本乙型脑炎病毒NS1蛋白的基因克隆和原核表达[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
6 杨波;张珈敏;蔡大威;李斗林;陈伍国;蒋洪;胡远扬;;黑胸大蠊浓核病毒ns1基因的功能研究[A];第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集[C];2006年
7 齐岩;袁润余;张贺楠;谢杰;单芬;胡月;李小康;陈晓春;赵丽荣;廖明;;H9N2亚型禽流感病毒广东分离株的全基因克隆及序列分析[A];中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第六届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2008年
8 徐高原;王祥;陈焕春;徐晓娟;李自力;何启盖;;乙型脑炎病毒NS1基因重组伪狂犬病毒的构建、安全性及免疫原性[A];湖北省生物工程学会2004年年会学术报告及论文摘要汇编[C];2004年
9 ;The non-structural(NS1) protein of influenza A virus associates with p53 and inhibits p53-mediated transcriptional activity and apoptosis[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
10 薛瑞雪;包旦奇;侯天龙;刘焕奇;李泽君;刘芹防;;水貂源H9N2流感病毒分子特征与致病性研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第五次学术研讨会论文集[C];2016年
11 黄艳艳;徐栋;胡北侠;张秀美;路希山;;分离自中国北方的四株H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因的分子进化分析[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年
12 张继荣;姚青;;2007~2011年H9N2亚型禽流感病毒血凝素分子进化分析[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
13 谢金文;沈志强;王金良;任艳玲;管宇;苗立中;;猪细小病毒(PPV)SD1株NS1基因的克隆与原核表达[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(上册)[C];2009年
14 冉伟;陈瑞玲;邓颖琦;钟颖;丁壮;丛彦龙;;H9N2亚型鸡流感病毒吉林分离株全基因克隆与序列分析[A];中国畜牧兽医学会2014年学术年会论文集[C];2014年
15 韩庆功;乔传玲;杨焕良;陈艳;辛晓光;陈化兰;赵玉军;;H9N2亚型猪流感病毒HA基因的克隆及体外表达[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会论文集[C];2006年
16 杨涛;刘明;张云;刘春国;杜绍范;;H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的原核表达及其间接ELISA检测方法的初步建立[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会论文集[C];2005年
17 梁萌;王化磊;冯昊;金宏丽;张仁舟;胡桂秋;杨松涛;夏咸柱;;猴源细小病毒NS1和VP2蛋白的分析[A];第十五次全国养犬学术研讨会暨第七次全国小动物医学学术研讨会论文集[C];2013年
18 王金良;沈志强;李峰;刘吉山;;3株相隔5到10年的H9N2亚型禽流感病毒HA基因差异分析[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(下册)[C];2009年
19 王金良;沈志强;李峰;刘吉山;管宇;曲光刚;唐娜;;3株不同年代H9N2亚型禽流感病毒HA基因差异分析[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集[C];2008年
20 王金良;沈志强;李峰;刘吉山;;3株相隔5到10年的H9N2亚型禽流感病毒HA基因差异分析[A];山东畜牧兽医学会禽病学专业委员会第一次学术研讨会论文集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前20条
1 张建楼;猪细小病毒非结构蛋白1(NS1)诱导细胞凋亡致母猪流产的分子机制研究[D];河北农业大学;2019年
2 周伟东;黑胸大蠊浓核病毒非结构蛋白NS1的定位对病毒感染的影响[D];武汉大学;2010年
3 平继辉;H9N2亚型禽流感病毒抗原变异及感染哺乳动物分子机制的研究[D];南京农业大学;2008年
4 徐大伟;H9N2亚型禽流感病毒与鸭坦布苏病毒的生物学特性研究及疫苗的初步研制[D];内蒙古农业大学;2012年
5 索朗斯珠;H9N2亚型禽流感病毒及新城疫病毒西藏分离株的生物学特性研究[D];华中农业大学;2011年
6 孟繁兴;鹅细小病毒非结构蛋白NS1与鹅胚成纤维细胞蛋白互作的研究[D];吉林农业大学;2015年
7 李建伟;欧亚大陆H9N2亚型禽流感病毒分子演化的研究[D];东北农业大学;2002年
8 李曦;中国大陆H9N2亚型禽流感病毒遗传演化关系的研究[D];中国农业科学院;2002年
9 朱光剑;中国南方H9N2禽流感病毒的分子进化分析及其对小鼠致病性研究[D];华东师范大学;2012年
10 韩亚娟;黑胸大蠊浓核病毒NS1的内切核酸酶活性及磷酸化研究[D];武汉大学;2012年
11 吴丹;猪细小病毒NS1基因与VP2基因的克隆、表达及VP2基因免疫的研究[D];东北农业大学;2002年
12 王维;H9N2禽流感病毒感染血管内皮细胞的基因表达谱研究[D];中国农业大学;2015年
13 张伟;1999年~2013年山东鸡源H9N2亚型禽流感病毒遗传演化和血凝素抗原性研究[D];中国农业大学;2015年
14 胡勇;流感病毒NS1蛋白以及SARS冠状病毒N蛋白参与的免疫逃逸机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2017年
15 吕静;H9N2亚型禽流感病毒气源性传染的监测及其分子机制的研究[D];山东农业大学;2012年
16 刘开拓;HA蛋白受体结合区及邻近区域适应性变异协同PB2-627K增强H9N2亚型禽流感病毒对小鼠致病性的机制研究[D];扬州大学;2021年
17 张宗德;禽流感病毒H9N2适应小鼠致肺脏CD4~+T细胞Th17应答的研究[D];华中农业大学;2012年
18 胡思顺;禽流感病毒H9N2亚型和鸡毒霉形体HS株主要抗原性基因的克隆与表达研究[D];华中农业大学;2005年
19 钟蕾;H9N2禽流感病毒在鸡群中气溶胶传播的分子机制及PA-X蛋白在H9N2病毒中功能初探[D];扬州大学;2014年
20 张谞霄;H9N2和H10N7亚型禽流感病毒对小鼠神经嗜性和致病性的机制研究[D];中国农业大学;2017年
中国硕士学位论文全文数据库 前20条
1 曹晓蕾;H9N2禽流感病毒NS1蛋白氨基酸点突变对诱导宿主细胞凋亡的影响[D];西北农林科技大学;2014年
2 王秋珍;H9N2禽流感病毒NS1蛋白诱导的氧化应激促进DF-1细胞凋亡[D];西北农林科技大学;2015年
3 黄锐坤;通用H9N2禽流感病毒抗原表位的筛选[D];深圳大学;2020年
4 郑丽荣;H9N2亚型禽流感病毒在疫苗抗体选择压的鸡体内连续传代后的抗原变异和基因分析[D];扬州大学;2019年
5 张溢珊;6株H9N2亚型AIV分离鉴定、全基因组分析及鹅源毒株感染与免疫特性研究[D];佛山科学技术学院;2018年
6 马丽莉;H9N2亚型禽流感病毒诱导鸡体表达细菌粘附相关蛋白的筛选及其功能初步验证[D];山东农业大学;2018年
7 杨玲玲;鸭源H9N2亚型AIV分离鉴定与荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用[D];山东农业大学;2017年
8 林秋敏;麻鸭H9N2亚型禽流感病毒生物学特性研究[D];福建农林大学;2011年
9 金吉东;日本脑炎病毒NS1基因的分子克隆与高效表达[D];延边大学;2002年
10 孙佳善;禽流感病毒NS1蛋白抗原表位不同筛选方法的差异分析[D];东北农业大学;2013年
11 蒋金梁;猪细小病毒NS1蛋白主要抗原域的原核表达及初步应用[D];吉林大学;2009年
12 杨达;H9N2亚型禽流感病毒冷适应致弱活疫苗候选株的培育及冷适应表型相关基因确定[D];扬州大学;2016年
13 宿春虎;2011-2013年华东地区禽流感病毒流行病学调查及H9N2亚型禽流感病毒的抗原性分析[D];扬州大学;2014年
14 潘红丽;犬细小病毒NS1非结构蛋白诱导宿主细胞凋亡的研究[D];河北农业大学;2012年
15 刘丽琦;H9N2禽流感病毒致病性的初步研究及反向遗传系统的构建[D];中国疾病预防控制中心;2009年
16 何奇松;广西马源H9N2亚型流感病毒的分离鉴定与全基因组序列分析[D];广西大学;2012年
17 周祺;鸭坦布苏病毒NS1蛋白单克隆抗体的制备及稳定表达细胞系的建立[D];安徽农业大学;2019年
18 孟刚;日本脑炎病毒NS1’蛋白单克隆抗体的制备及其B细胞表位的初步鉴定[D];南京农业大学;2014年
19 陈振师;稳定表达乙型脑炎病毒NS1蛋白细胞系的建立[D];河北农业大学;2012年
20 李波;乙型脑炎病毒NS1基因原核表达及脑炎抗体检测方法的初步研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978