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Copine-3-增强型绿色荧光蛋白融合蛋白在细胞中的表达和定位

李游  徐丽明  张琦敏  杨素芳  卢春花  
【摘要】:目的构建增强型绿色荧光蛋白(p EGFP)-N1-CPNE3真核表达载体,检测Copine-3蛋白在细胞中的表达和定位。方法利用RT-PCR从人支气管上皮细胞(HBE)中扩增得到编码Copine-3蛋白的CPNE3基因,并亚克隆至p EGFP-N1真核表达载体。将酶切鉴定和测序正确的pEGFP-N1-CPNE3重组质粒转染293T和H1299细胞。激光扫描共焦检测Copine-3-EGFP融合蛋白的细胞定位,Western blotting检测亚细胞组分中Copine-3蛋白的表达,免疫组织化学检测肺腺癌患者癌临床样品中的Copine-3蛋白定位。结果编码Copine-3蛋白的CPNE3基因克隆到了p EGFP-N1真核表达载体中,并在293T和H1299细胞中表达。通过免疫荧光染色、Western blotting和免疫组织化学确定Copine-3蛋白定位于细胞质和细胞核。结论成功构建p EGFP-N1-CPNE3真核表达载体,Copine-3蛋白定位于细胞质和细胞核。

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