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趋化因子MIP-3α的克隆与表达

罗福康  郑红  沈大斌  
【摘要】:目的 克隆人趋化因子MIP 3α基因,表达并初步纯化MIP 3α融合蛋白。方法 从扁桃体中提取总RNA ,再进行RT PCR ,扩增MIP 3α成熟蛋白基因,并在5’和3’分别添加NcoI和EcoRI酶切位点,通过这两个酶切位点重组于pET3 2a(+ )载体上,转化E .coli.DH5α,筛选阳性克隆,酶切鉴定,DNA测序检测插入序列的正确性,缺失突变获得MIP 3α天然蛋白表达载体pET3 2a(+ ) /MIP 3α,SDS PAGE分析其表达,Westernblot验证融合蛋白。大量表达并初步纯化MIP 3α融合蛋白。结果 成功克隆了MIP 3α基因,表达并初步纯化得到MIP 3α融合蛋白。结论 构建的MIP 3α硫氧还蛋白融合表达载体以可溶性蛋白的方式表达MIP 3α硫氧还蛋白。

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