基于TGF-β_1/Smads/ACTA2信号通路探讨猪食管ESD环切术后狭窄模型人工溃疡纤维化的机制

【摘要】：目的 基于转化生长因子β1(TGF-β_1)/Smads/α-肌动蛋白-2(ACTA2)信号通路探讨猪食管内镜黏膜下剥离术(ESD)环切术后人工溃疡纤维化的机制。方法 将8头实验白猪分为假手术组(n=4)与模型组(n=4)，模型组通过ESD环切术建立猪食管狭窄模型。术后第3周分别采集两组猪食管组织，采用HE染色观察食管组织的病理特征，采用实时荧光定量PCR检测TGF-β_1、Smad2、Smad3、ACTA2 mRNA的相对表达水平，采用免疫组化法检测结缔组织生长因子(CTGF)、ACTA2的阳性表达情况，采用Western blotting检测TGF-β_1、Smad2/3、p-Smad2/3、Smad4、Smad7、CTGF、ACTA2蛋白的相对表达水平。结果 与假手术组比较，模型组人工溃疡部位成纤维细胞(FB)大量增殖，并向肌成纤维细胞(MFB)表型转化。实时荧光定量PCR显示，与假手术组比较，模型组TGF-β_1 (P0.001)、Smad3(P=0.004)、ACTA2(P=0.001)mRNA表达均明显上调。免疫组化结果显示，与假手术组比较，模型组CTGF(P0.001)、ACTA2(P0.001)的表达明显升高。Westernblotting结果显示，与假手术组比较，模型组TGF-β_1(P=0.002)、Smad2/3(P=0.003)、p-Smad2/3(P=0.002)、Smad4(P0.001)、Smad7(P=0.016)、CTGF(P0.001)、ACTA2(P0.001)蛋白表达均明显上调，差异有统计学意义。结论 成功建立ESD环切术后猪食管狭窄模型，该模型人工溃疡纤维化的形成可能与TGF-β_1/Smads/ACTA2信号通路相关。