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安五脂素对小鼠肺纤维化的改善作用及其机制研究

陈悦琪  陈奕良  郭春花  徐铭晨  方菁  王宇瑶  郝凯敏  王春靖  王春梅  庄文越  
【摘要】:目的 探讨安五脂素对肺纤维化的干预作用及其机制。方法 雄性ICR小鼠65只,随机分成对照组、BLM模型组、安五脂素低剂量组(1 mg/kg)、安五脂素高剂量组(4 mg/kg)与N-乙酰半胱氨酸组(150 mg/kg),每组13只。采用气管灌注5 mg/kg博来霉素(BLM)诱导小鼠肺纤维化模型。收集各组小鼠血清和肺组织,采用HE染色和Masson三色染色观察肺组织病理学变化并进行肺纤维化评分;采用试剂盒测定血清氧化应激指标及肺组织羟脯氨酸(HYP)含量;采用Western blotting及qRT-PCR检测铁死亡通路相关基因的表达水平。取对数生长期HFL-1细胞:(1)设置对照组与安五脂素给药组(0.3125、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、80μmol/L),采用CCK-8法检测安五脂素对HFL-1细胞的毒性作用。(2)设置对照组、转化生长因子(TGF)-β_1模型组、安五脂素低剂量组(5μmol/L)与安五脂素高剂量组(10μmol/L),以TGF-β_1诱导肺纤维化细胞模型,采用试剂盒测定氧化应激指标及活性氧(ROS)水平,采用Western blotting及qRT-PCR检测铁死亡通路相关基因的表达水平。结果 HE染色、Masson染色结果及肺组织HYP含量测定结果均提示BLM诱导的小鼠肺纤维化模型构建成功,给予安五脂素后肺纤维化表型明显改善。CCK-8检测结果显示,当安五脂素浓度20μmol/L时对HFL-1细胞的增殖活性无明显影响(P0.05)。与BLM或TGF-β_1模型组比较,给予安五脂素可明显提高小鼠血清及HFL-1细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性及谷胱甘肽(GSH)水平,明显降低丙二醛(MDA)含量(P0.01或P0.001)。与TGF-β_1模型组比较,给予10μmol/L安五脂素可明显降低HFL-1细胞中ROS水平(P0.01)。Westernblotting和qRT-PCR检测结果显示,给予安五脂素可明显上调小鼠肺组织及HFL-1细胞中铁死亡通路中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、转铁蛋白(TF)的表达水平,下调转铁蛋白受体1(TFR1)的表达水平(P0.05、P0.01或P0.001)。结论 安五脂素可通过抑制氧化应激和铁死亡而改善肺纤维化,为开发肺纤维化的治疗药物提供了一定的理论基础。

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