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hHO-1联合GATA-4修饰大鼠骨髓间充质干细胞抗凋亡及向心肌分化的实验研究

邓宁波  曾元清  韩腾龙  蒋知新  
【摘要】:目的探讨经人血红素加氧酶1(hHO-1)基因和GATA-4基因联合修饰的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)在缺血缺氧环境中抗凋亡及体外分化为心肌细胞样细胞的能力是否优于hHO-1或GATA-4单基因修饰的BMSCs。方法采用全骨髓贴壁法分离、培养BMSCs并进行鉴定,重组腺病毒转染BMSCs,Western blotting法确定基因表达的最佳时间;以缺氧无血清条件模拟体内缺血缺氧微环境培养基因修饰的BMSCs,采用CCK-8试剂盒和台盼蓝染色法分别检测缺血缺氧培养12、24、48、72h细胞存活率,流式细胞术检测缺血缺氧培养24h细胞凋亡情况,Western blotting及细胞免疫荧光法检测特异性心肌肌钙蛋白I(cTnI)表达情况。结果缺血缺氧培养12、24、48、72h的hHO-1+GATA-4组细胞生存率均高于hHO-1组(P0.05)和GATA-4组(P0.05)。缺血缺氧培养24h的hHO-1+GATA-4组细胞凋亡率低于hHO-1组(P0.05)和GATA-4组(P0.05);GATA-4组与hHO-1+GATA-组的c Tn I表达差异无统计学意义。结论 hHO-1与GATA-4联合修饰可明显增强缺血缺氧BMSCs的存活;与GATA-4单基因修饰相比,联合修饰并没有增强BMSCs向心肌细胞分化的能力。

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