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Wortmannin抑制PI3K信号通路对人甲状腺滤泡癌细胞迁移侵袭能力的影响

孙建娟  刘纯  汤为学  
【摘要】:目的利用特异性PI3K抑制剂wortmannin抑制PI3K信号通路,研究其对人甲状腺滤泡癌细胞CGTHW-1迁移和侵袭能力的影响,并初步探索其作用机制。方法培养CGTHW-1细胞,用MTT法筛选wortmannin最佳作用浓度及时间。将细胞分为实验组和对照组(分别在血清饥饿和含血清两种条件下培养)。对照组细胞未给予任何处理,实验组细胞用wortmannin进行处理。通过划痕实验、Transwell小室侵袭实验分别观察wortmannin对细胞迁移及侵袭能力的影响。利用FITC标记的鬼笔环肽进行微丝免疫荧光染色,观察在wortmannin作用下细胞的形态学变化。免疫细胞化学SP法及半定量RT-PCR法检测wortmannin对细胞Rac1蛋白、mRNA表达的影响。结果在含血清培养液培养条件下,经wortmannin处理后,划痕伤口愈合速度减慢,CGTHW-1细胞侵袭至小室下层细胞数(13.8±3.03个)明显低于对照组(41.6±6.95个,P0.01);wortmannin显著降低Rac1蛋白及mRNA的表达(P0.05)。而在血清饥饿条件下,两组细胞迁移均受抑制,侵袭细胞数组间差异无统计学意义(P0.05)。结论wortmannin能有效抑制人甲状腺癌细胞迁移侵袭,其作用机制可能是通过抑制PI3K下游分子Rac1,从而引起细胞骨架重构。PI3K及Rac1可能成为抑制甲状腺癌转移的关键性分子。

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