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地黄低聚糖诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究

王新华  王士雯  李泱  周荣斌  李宗斌  赵玉生  朱庆磊  尹明  卢才义  
【摘要】:目的观察地黄低聚糖(RGOs)体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)定向分化为心肌样细胞的作用。方法采用贴壁培养法分离大鼠MSCs,反复传代及纯化后,取第8代MSCs进行分组诱导:RGOs组(RGOs终浓度100μg/ml)、5-氮胞苷(5-Aza)组(5-Aza终浓度10μmol/L)、RGOs+5-Aza组和空白对照组。诱导后继续培养4周。采用Access化学发光法和干化学法分别检测诱导后MSCs内心肌特异性肌钙蛋白I(cTnI)和心肌酶CK、CK-MB的表达,免疫荧光法和Western blotting法检测诱导后MSCs内cTnI、缝隙连接蛋白43(Cx43)的表达。结果诱导后各组MSCs均表达cTnI、CK和CK-MB,RGOs+5-Aza组中CK、CK-MB的表达水平较RGOs组、5-Aza组增高,差异有统计学意义(P0.05)。免疫荧光结果显示:在未诱导MSCs的空白对照组中未发现cTnI、Cx43阳性细胞,各诱导组MSCs均可见cTnI阳性细胞和Cx43阳性细胞,且RGOs+5-Aza组cTnI、Cx43荧光强度较RGOs组、5-Aza组增高。Westernblotting结果显示空白对照组无阳性条带出现,各诱导组均出现cTnI和Cx43阳性条带,且RGOs+5-Aza组cTnI和Cx43表达量较RGOs组、5-Aza组增高。结论RGOs可以在体外诱导大鼠MSCs分化为心肌样细胞,与5-Aza联合应用后其诱导MSCs内心肌特异性物质表达的作用较单药更强。

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