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用三甲基甘氨酸克服G+C丰富靶基因的PCR扩增困难

白雪源  车凤翔  陈香美  
【摘要】:为探讨三甲基甘氨酸等有机溶剂对G +C碱基丰富基因PCR扩增困难的影响 ,分别用标准PCR和添加有甘油、二甲基亚砜 (DMSO)、甲酰胺及三甲基甘氨酸的改进型PCR对G +C含量为 70 %的周期蛋白依赖性激酶抑制剂基因(ARF)和G +C含量为 90 %的胰岛素样生长因子受体Ⅱ (IGFRⅡ)进行扩增。结果显示 ,应用标准PCR及添加有甘油或甲酰胺的PCR均不能特异性扩出上述两基因 ;加入10 %DMSO虽可扩出ARF基因但同时有非特异性产物 ;而加入三甲基甘氨酸可特异地扩增出 6 4 2bp的ARF和 5 4 0bp的IGFRⅡ基因。表明三甲基甘氨酸可消除G +C丰富DNA区域二级结构对PCR扩增的干扰 ,明显促进这类基因的PCR扩增。

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