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转基因水稻中转录水平cry1Ab基因的沉默及其阶段复活

吴刚  崔海瑞  舒庆尧  夏英武  高明尉  吴刚  李毅  叶恭银  I.Altosaar  
【摘要】:以田间环境释放条件下农杆菌介导法转化而成的转cry1Ab基因水稻为研究对象,利用GUS组织化学染色法、Western杂交技术,在不抗虫转基因中8215株系后代中筛选到一个无Cry1Ab蛋白表达产物株系.分子杂交结果证实,转基因cry1Ab在中8215株系后代中发生了转录水平沉默,整合过程中基因重排使两个拷贝的ubiquitin启动子同时插入到水稻基因组中.甲基化分析证实ubiquitin启动子区域发生了甲基化,从而导致cry1Ab基因沉默.利用去甲基化试剂5-氮胞苷处理转基因沉默水稻种子,并在苗期、分蘖期、孕穗期、灌浆期及成熟期检测了其对沉默基因的复活效应,结果表明:5-氮胞苷处理使沉默的cry1Ab基因在灌浆期恢复表达活性,复活率约为8%~30%,且以低浓度(45mg/L处理 1,2d)处理的复活率及恢复表达水平较高,复活基因表达的Cry1Ab蛋白最高可达可溶性总蛋白的0.147%.

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