基于CRISPR/Cas9介导的同源重组技术构建TK、gE和gI基因缺失的伪狂犬病病毒

【摘要】：为构建TK、gE和gI基因缺失的伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV),采用CRISPR/Cas9介导的同源重组技术,对从湖北某猪场送检的病料中分离到的PRV HB2017株进行基因编辑,并利用蚀斑纯化等方法获取基因缺失株。随后,采用PCR、基因测序、间接免疫荧光试验、生长曲线测定及安全性和效力试验对基因缺失株的特性进行初步研究。结果显示:PRV HB2017株的TK、gE和gI基因已缺失,缺失毒株PRV HB2017ΔTKΔgE/gI与亲本毒株PRV HB2017株在PK-15细胞中的生长曲线差异不明显且具有较高的病毒滴度;PRV HB2017ΔTKΔgE/gI株传代至30代,TK和gE/gI基因缺失部分序列稳定,不能恢复;PRV HB2017ΔTKΔgE/gI株对仔猪是安全的;将该基因缺失株以10~(6.0) TCID_(50)和10~(7.0) TCID_(50)的病毒剂量接种仔猪,可保护仔猪免受10~(8.0) TCID_(50)病毒剂量强毒的攻击。

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前18条

1	吕素芳;郭广君;魏凤;王文秀;董炳梅;毕研丽;苗立中;沈志强;;猪伪狂犬病病毒gE~-/gI~-/TK~-多基因缺失活疫苗对猪的安全性与免疫效力研究[J];动物医学进展;2014年04期
2	范克伟;戴爱玲;李晓华;吴德峰;江丹丹;闫娜娜;杨小燕;;猪源伪狂犬病病毒福建龙岩分离株的鉴定及其TK基因和gE基因的分子特征[J];中国兽医科学;2015年10期
3	姜焱,侯玉峰,陈德胜,陈溥言;伪狂犬病病毒上海株gE和gI基因的克隆及缺失转移载体的构建[J];中国病毒学;2002年02期
4	邹伟斌;陈坚;赖月辉;牛贝贝;穆光慧;齐冬梅;;利用CRISPR/Cas9技术构建PRVGD株gI和gE缺失毒株及其生物学特性研究[J];现代畜牧兽医;2019年12期
5	曹龙龙;刘照虎;刘方峰;孟凡亮;李焱;焦秋林;姜子昕;杨玉栋;李宝全;刘思当;;猪伪狂犬病综合诊断及分离毒株gE和TK基因遗传变异分析[J];中国细胞生物学学报;2020年01期
6	姜焱,陈溥言;伪狂犬病病毒上海株gE和gI基因的克隆及序列分析[J];中国预防兽医学报;2002年04期
7	万曾培;庞旋飞;王征帆;伍建敏;李中圣;王贵平;白挨泉;;1株变异伪狂犬病病毒的分离鉴定及gE和TK基因序列分析[J];中国兽医学报;2020年04期
8	李宁;吴志明;闫若潜;赵雪丽;王淑娟;马震原;周兵强;刘毅;张珂;;2012-2014年河南省猪伪狂犬病病毒gE基因和TK基因的遗传变异分析[J];中国兽医学报;2016年10期
9	张艳萍;刘长军;秦运安;张晓巍;张颖;;鸡马立克病病毒814株gE、gI、gp82基因的克隆及序列分析[J];动物医学进展;2007年03期
10	钟承;刘蕾;张乐天;王巨实;王安琦;陆宝生;杨万莲;吕艳丽;;伪狂犬病病毒BJ/YT株毒力相关基因gE和TK序列分析[J];中国畜牧兽医;2014年11期
11	邹伟斌;赖月辉;牛贝贝;吴文福;齐冬梅;;猪伪狂犬病病毒变异株GD株的分离鉴定及TK和gE基因的进化分析[J];现代畜牧兽医;2019年10期
12	孙佳楠;王楠楠;王瑞;高慎阳;刘丽颖;周铁忠;董筱萍;;猪伪狂犬病病毒LN1301株分离鉴定及其gE和TK基因的变异分析[J];中国兽医学报;2016年08期
13	郑慧华;田润博;徐通;崔建涛;侯承尧;赵宇;郑兰兰;刘芳;陈红英;;猪伪狂犬病病毒变异株gE/gI/TK三基因缺失株rPRV NY-gE~-/gI~-/TK~-的纯化及生物学特性[J];中国兽医学报;2020年09期
14	邵伟娟,胡建华,谢建云,高诚,张婉华;伪狂犬病病毒沪株gE基因序列测定与比较分析[J];上海农业学报;2005年04期
15	姜焱,侯玉峰,陈德胜,黄伟坚,范伟兴,陈溥言;伪狂犬病病毒上海株的gI基因的克隆和序列分析[J];动物医学进展;2002年02期
16	李继东;才学鹏;;山羊痘病毒TK基因功能缺失对其增殖的影响[J];中国畜牧兽医;2017年02期
17	徐宁;周甜;侯国俊;沈南;唐元家;;CRISPR/Cas9介导的同源重组在非编码区疾病相关位点功能研究中的应用[J];上海交通大学学报(医学版);2021年01期
18	樊毅;李碧;郭万柱;李萍;黄剑波;杨凡;姜子义;赵军;许思遥;邓益超;殷玥;毛汐语;吕雯婷;徐志文;朱玲;;伪狂犬病毒gE、gI和US9三基因缺失株的构建[J];浙江农业学报;2017年04期

中国重要会议论文全文数据库

前20条

1	耿海洋;聂红毅;张猛;李志国;苏松坤;;基于CRISPR/Cas9基因编辑技术的蜜蜂分子育种平台的研究[A];第十二届海峡两岸蜜蜂与蜂产品高峰论坛暨首届中国西安（蓝田）秦岭中蜂扶贫产业发展论坛论文集[C];2018年
2	张金三;邓志会;谭晓华;Daniel D.Billadeau;李校堃;;Crispr/Cas9核酸酶系统在体外培养细胞的基因敲除及无痕编辑中的应用[A];中国生物工程学会2014年学术年会暨全国生物技术大会论文集[C];2014年
3	李宁;吴志明;闫若潜;赵雪丽;王淑娟;马震原;周兵强;;2012-2014年河南省猪伪狂犬病毒gE基因和TK基因的遗传变异分析[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会论文集[C];2015年
4	于作;朱远茂;高欲燃;董秀梅;吕闯;薛飞;;牛传染性鼻气管炎病毒gE蛋白单抗的制备及鉴定[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年
5	王海燕;朱远茂;薛飞;童光志;赵立平;相文华;韩文瑜;;牛传染性鼻气管炎病毒gE基因的克隆表达与鉴定[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会论文集[C];2005年
6	韩先杰;王君伟;马波;;鸭瘟病毒TK基因的克隆及序列分析[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年
7	王川庆;杨霞;陈陆;;4株猪伪狂犬病病毒gE基因的克隆与序列分析[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集（上册）[C];2009年
8	马增军;芮萍;刘曜综;王秋悦;杨彩然;刘谢荣;吴建华;;貂、狐、猪源伪狂犬病毒gE基因比较分析[A];中国毛皮动物科学研究进展——2014年全国毛皮动物专业学术研讨会论文集[C];2014年
9	夏德利;黄立平;杜文娟;王一平;危艳武;谢永兴;刘丹;吴红丽;冯力;刘长明;;表达PCV2-Cap蛋白的TK-/gE-/gG-重组伪狂犬病毒的构建及其免疫原性研究[A];中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会论文集[C];2016年
10	文明;周碧君;王开功;罗阿东;;山羊痘病毒基因组的提取、酶切及其TK基因克隆分析[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会论文集[C];2009年
11	高晓云;马世杰;郭官鹏;陈龙彪;陈红英;;猪伪狂犬病毒河南分离株gE全基因的克隆与序列分析[A];中国畜牧兽医学会2013年学术年会论文集[C];2013年
12	刘文强;范伟兴;赵宏坤;;伪狂犬病病毒La株gE基因的序列分析及真核表达载体的构建[A];猪的重要传染病防治研究新成果——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第五届理事会第二次全体会议暨防检疫专业委员会第7次学术交流会论文集[C];2002年
13	徐晓娟;徐高原;陈焕春;刘正飞;何启盖;;伪狂犬病病毒TK~-/gG~-缺失株的构建[A];中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第七次学术研讨会论文集[C];2004年
14	武吉强;徐晶晶;叶超;童武;王涛;郑浩;李国新;童光志;;伪狂犬病病毒变异株gE单克隆抗体的制备[A];中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会论文集[C];2016年
15	钟承;张乐天;王巨实;陆梓杰;刘蕾;杨万莲;孙艳争;吕艳丽;;犬源伪狂犬病毒BJ-RD株的分离鉴定及gE基因分析[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会论文集[C];2013年
16	苏鑫铭;于春梅;王敏秀;曹瑞兵;周斌;陈溥言;;PrV上海株TK基因缺失株的构建及其生物学特性研究[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
17	田净净;杨哲;刘菲菲;杨祎擎;刘洋洋;韩笑;吕贝;宋成义;高波;崔恒宓;;CRISPR/Cas9系统介导的早期斑马鱼IncRNA的沉默[A];遗传多样性：前沿与挑战——中国的遗传学研究（2013-2015）——2015中国遗传学会大会论文摘要汇编[C];2015年
18	樊淑华;李文刚;吴凤笋;项朝荣;韩勇;卢中华;;猪伪狂犬病病毒闽A株gE基因的克隆表达及其表达蛋白变性复性的研究[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会论文集[C];2006年
19	刘小凤;王敏;刘小红;陈瑶生;何祖勇;;利用CRISPR/Cas9编辑广东小耳花猪IGF2基因[A];第25届广东省科技进步活动月畜牧兽医学术与科技创新发展大会论文集[C];2016年
20	葛菡;徐超;程安春;汪铭书;贾仁勇;朱德康;罗启慧;陈孝跃;;鸭Ⅰ型疱疹病毒TK基因的发现及其分子特性[A];第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛论文集（下册）[C];2008年

中国博士学位论文全文数据库

前20条

1	董静;猪伪狂犬病毒gI和gE基因在其毒力增强中的作用及三基因缺失活疫苗的构建[D];南京农业大学;2017年
2	姜焱;伪狂犬病病毒上海株gE～-/gI～-/GFP～+/LacZ～+缺失株的构建及其免疫原性初步研究[D];南京农业大学;2002年
3	钟国瑞;CRISPR/Cas9介导皮肤致敏评价细胞模型EndoSens的建立与评估研究[D];华南理工大学;2019年
4	周建奎;双sgRNA策略便利于CRISPR/Cas9系统介导的基因组改造和动物模型构建[D];南京大学;2016年
5	吴凤笋;河南省免疫猪场伪狂犬病毒分离株生物学特性研究及gE、TK基因双缺失毒株的构建[D];吉林大学;2018年
6	闫娜娜;哺乳动物细胞CRISPR/Cas9介导精准基因编辑富集系统的构建、应用及优化研究[D];西北农林科技大学;2019年
7	吕嘉伟;酶切基因组构建CRISPR/Cas9介导的全基因组敲除文库及验证[D];东北农业大学;2019年
8	沈兰;基于CRISPR/Cas9的水稻多基因编辑及其在育种中的应用[D];扬州大学;2017年
9	张涛;CRISPR/Cas9系统介导小鼠维生素D受体基因敲除研究[D];西北农林科技大学;2016年
10	刘玟杉;基于CRISPR/Cas9的拟南芥多基因编辑及其在基因功能研究中的应用[D];重庆大学;2015年
11	周傲;全基因组CRISPR/Cas9文库筛选的宿主基因及细胞自噬在猪病毒复制中的作用与机理研究[D];华中农业大学;2016年
12	彭冉;黄色粘球菌CRISPR系统的功能分析及CRISPR/Cas9在粘球菌中的应用研究[D];山东大学;2017年
13	高元鹏;应用CRISPR/Cas9系统生产NRAMP1基因精准插入的转基因牛[D];西北农林科技大学;2017年
14	徐坤;源于嗜热链球菌的真核CRISPR/Cas9系统的建立、优化及其应用研究[D];西北农林科技大学;2015年
15	刘颖竹;萱草成花相关基因功能分析及CRISPR/Cas9系统介导成花基因功能敲除研究[D];北京林业大学;2020年
16	常华;鸭瘟病毒gE基因功能初步研究[D];四川农业大学;2011年
17	邢慧丽;CRISPR/Cas9系统在植物基因组编辑中的应用[D];中国农业大学;2017年
18	吴芸;CRISPR/Cas9高效等位基因编辑系统的构建及其在猪基因组编辑中的应用研究[D];西北农林科技大学;2017年
19	李斌;CRISPR/Cas9介导的丹参基因组编辑与丹参酮合成路径的研究[D];华中科技大学;2017年
20	白义春;CRISPR/Cas9技术在鸡、猪基因组编辑研究中的应用及一种新型基因无缝编辑技术的开发研究[D];西北农林科技大学;2016年

中国硕士学位论文全文数据库

前20条

1	胡涛;伪狂犬病病毒gD、gE、TK基因的克隆与通用转移载体的构建[D];河南农业大学;2003年
2	吴文浩;牛传染性鼻气管炎病毒全基因测序和gE基因缺失株的构建及鉴定[D];南京农业大学;2013年
3	吴一磊;CRISPR/Cas9系统介导的小麦TaEPFL1基因编辑研究[D];西华师范大学;2019年
4	赵晨;圆红冬孢酵母CRISPR/Cas9基因编辑系统的建立[D];青岛大学;2019年
5	徐登辉;基于CRISPR/Cas9的一种胞嘧啶碱基编辑器的初步探究[D];哈尔滨工业大学;2019年
6	易雨珊;利用CRISPR/Cas9技术对果蝇的多个基因位点进行编辑[D];福州大学;2018年
7	徐俊杰;CRISPR/Cas9全基因组慢病毒文的扩增及其在研究PCSK9作用机制中的应用[D];武汉大学;2018年
8	郝华;利用CRISPR/Cas9技术构建干扰素受体敲除的细胞系及功能研究[D];武汉大学;2017年
9	吴清清;利用CRISPR/Cas9系统编辑水稻淀粉合成相关的SSIIIα与PPDK的定点突变研究[D];上海师范大学;2019年
10	周杰;CRISPR/Cas9介导的玉米转录因子ZmThx20和ZmPTF1定点编辑[D];山东大学;2019年
11	田茂竹;应用CRISPR/Cas9技术定向突变烟草CYP71D16基因的研究[D];贵州大学;2019年
12	冯旭;基于crispr/cas9的大肠杆菌基因编辑方法研究[D];西华师范大学;2018年
13	黄玉;山羊CRISPR/Cas9基因编辑系统优化的研究[D];西北农林科技大学;2018年
14	赵恒;甘蓝型油菜CRISPR/Cas9编辑体系的构建及其对BnSVP的编辑效果[D];长江大学;2018年
15	张敏杰;利用CRISPR/Cas9实现果蝇的基因敲入[D];福州大学;2016年
16	唐旺;长爪沙鼠CRISPR/Cas9基因敲除方法的初步建立[D];首都医科大学;2016年
17	覃广胜;伪狂犬病病毒广西B、W株gE基因的扩增、克隆及序列分析[D];广西大学;2002年
18	吴倩;牛传染性鼻气管炎病毒gE蛋白原核表达及间接ELISA检测方法的初步建立[D];内蒙古农业大学;2020年
19	朱智慧;不同产地黄花蒿转录组分析及CRISPR/Cas9在黄花蒿中的应用[D];淮北师范大学;2020年
20	潘文欢;小球藻CRISPR/Cas9基因编辑流程的建立和优化[D];华南理工大学;2016年

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