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锯缘青蟹碱性磷酸酶分离纯化及部分理化性质研究

陈清西  张喆  庄总来  陈祥仁  
【摘要】:于1995年2月在厦门海域采集锯缘青蟹,取其内脏经正丁醇抽提、硫酸铵分级分离、DEAE-52离子交换柱层析及SephadexG-200凝胶过滤柱层析纯化,获得碱性磷酸酶制剂,以快速蛋白液相色谱及聚丙烯酰胺凝胶电泳检验其纯度,获得单一蛋白纯的酶制剂。研究酶的物理性质得出该酶的紫外特征吸收峰在278nm处,荧光激发光谱特征峰在282nm处,荧光发射光谱特征峰在343nm处,全酶分子量为78kD。研究酶催化对-硝基苯磷酸二钠水解的动力学性质,金属离子及有机溶剂对其活力的影响,得知该酶水解对-硝基苯磷酸二的最适温度为52℃,最适pH为9.2,米氏常数为6.67×10-4mol/L,酶活性中心的转换常数为460min-1;Mg2+对酶有显著的激活作用;Cn2+,Hg2+和甲醇、乙醇、乙二醇对酶有不同程度的抑制,说明在一定条件下,效应物引起酶分子构象发生了不同程度的变化。

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