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脑和肌肉芳香烃受体核转运样蛋白1在食管鳞状细胞癌组织中表达变化及对KYSE150细胞增殖和迁移的影响

杨壮壮  姚文健  王建军  夏天  魏立  
【摘要】:目的 观察食管鳞状细胞癌(鳞癌)组织脑和肌肉芳香烃受体核转运样蛋白1(brain and muscle ARNT-like protein 1, BMAL1)表达变化,探讨BMAL1对食管鳞癌KYSE150细胞增殖和迁移的影响。方法 食管鳞癌患者82例,取手术切除癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR法检测BMAL1 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测BMAL1蛋白相对表达量,并进行比较。以癌组织BMAL1 mRNA相对表达量中位数为界,将82例患者分为BMAL1高表达组(BMAL1 mRNA相对表达量≥6.94)37例和BMAL1低表达组(BMAL1 mRNA相对表达量6.94)45例,比较BMAL1高、低表达组临床病理特征。取对数生长期食管鳞癌KYSE150细胞,分为对照组(转染空载慢病毒)、BMAL1过表达组(转染BMAL1过表达慢病毒)、回复实验组(转染BMAL1过表达慢病毒及BMAL1 shRNA慢病毒),转染72 h,采用实时荧光定量PCR法检测3组细胞BMAL1 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测BMAL1蛋白相对表达量,采用CCK-8实验检测细胞增殖的吸光度(optical density, OD)值,采用细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成数目,采用细胞划痕实验检测细胞迁移率。结果 食管鳞癌组织BMAL1 mRNA及蛋白(6.81±0.62、0.65±0.15)相对表达量均低于癌旁组织(7.74±0.79、0.97±0.13)(P0.05)。BMAL1低表达组年龄60岁(80.0%)、T分期T_3~T_4期(86.7%)、临床分期Ⅱb~Ⅲ期(86.7%)、脉管侵犯(66.7%)、神经侵犯(71.1%)及淋巴结转移(80.0%)比率均高于BMAL1高表达组(48.6%、54.1%、54.1%、43.2%、32.4%、29.7%)(P0.05),性别、肿瘤直径、病理分级与BMAL1高表达组比较差异均无统计学意义(P0.05)。BMAL1过表达组细胞BMAL1 mRNA及蛋白相对表达量(11.03±0.56、0.83±0.09)均高于对照组(9.27±0.48、0.35±0.09)和回复实验组(10.04±0.45、0.44±0.08)(P0.05);回复实验组细胞BMAL1 mRNA及蛋白相对表达量与对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。3组细胞转染后培养0 h时细胞增殖OD值比较差异无统计学意义(P0.05);BMAL1过表达组转染后培养24 h时细胞增殖OD值(0.44±0.03)低于对照组(0.55±0.04)(P0.05),BMAL1过表达组与回复实验组(0.48±0.12)、回复实验组与对照组比较差异均无统计学意义(P0.05);BMAL1过表达组转染后培养48、72 h时细胞增殖OD值(0.73±0.04、0.90±0.03)均低于对照组(0.94±0.04、1.23±0.03)和回复实验组(0.86±0.03、1.15±0.05)(P0.05),回复实验组与对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。BMAL1过表达组细胞克隆形成数目[(322.88±31.37)个]少于对照组[(517.63±10.51)个]和回复实验组[(494.13±9.46)个](P0.05),细胞迁移率[(11.67±0.88)%]低于对照组[(32.26±1.41)%]和回复实验组[(29.93±0.14)%](P0.05);回复实验组细胞克隆形成数目、细胞迁移率与对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论 食管鳞癌组织BMAL1呈低表达,提示肿瘤恶性程度高,上调BMAL1表达可抑制食管鳞癌KYSE150细胞增殖和迁移。

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