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IKKβ缺失和NF-κB p65缺失对小鼠成骨细胞分化的影响

郝倩云  刘壮壮  周斌辉  冯心雨  黄蓉  
【摘要】:目的:探讨IKKβ和NF-κB p65缺失对小鼠成骨细胞分化的影响。方法:使用CRISPR/Cas9基因编辑工具分别敲除小鼠前成骨细胞MC3T3-E1中的Ikbkb或Rela基因,获得不表达IKKβ或NF-κB p65蛋白的Ikbkb~(-/-) MC3T3-E1和Rela~(-/-) MC3T3-E1细胞。用10 mmol/Lβ-甘油磷酸+50 mg/L抗坏血酸诱导MC3T3-E1、Ikbkb~(-/-) MC3T3-E1、Rela~(-/-) MC3T3-E1细胞成骨分化。诱导培养4 d后,qPCR法检测细胞中成骨分化标志性基因Sp7、Alpl、Spp1、Bglap mRNA的表达,Western blot法检测细胞中成骨分化相关蛋白ALPL、FZD9的表达;16 d后,茜素红染色法检测细胞外基质矿化水平。结果:诱导培养后Ikbkb~(-/-) MC3T3-E1细胞中Sp7、Alpl、Bglap mRNA表达以及ALPL、FZD9蛋白表达高于MC3T3-E1细胞和Rela~(-/-) MC3T3-E1细胞(P0.010);Ikbkb~(-/-) MC3T3-E1细胞外基质矿化水平高于MC3T3-E1和Rela~(-/-) MC3T3-E1细胞(P0.010),而Rela~(-/-) MC3T3-E1与MC3T3-E1细胞比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:IKKβ缺失与NF-κB p65缺失在成骨细胞分化过程中的功能可能不同,IKKβ缺失促进成骨细胞分化,而NF-κB p65缺失则无此作用。

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