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miR-605对非小细胞肺癌细胞放射敏感性的影响

周东亚  张海兵  耿晓如  章杭  胡阳阳  周雷  王小龙  张璇  
【摘要】:目的探讨miR-605对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞放射敏感性的影响及机制。方法人肺腺癌细胞A549常规培养,使用Lipofectamine 2000转染试剂转染,分为miR-605模拟物组(miR-605 mimic)、miR-605抑制剂组(miR-605 inhibitor)和空白对照组(NULL),通过qRT-PCR实验检测3组细胞miR-605的表达,细胞克隆法检测3组细胞的细胞活力,细胞凋亡实验检测各组细胞凋亡水平;生物信息学算法确定肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(tTNFAIP3)是miR-605的潜在靶点,Western blot实验检测各组细胞TNFAIP3蛋白含量;将NFAIP3 3'-UTR报告质粒(pRL-TNFAIP3)转染进修饰过miR-605的A549细胞,采用双荧光素酶检测系统检测细胞中的荧光素酶活性,并观察其辐射敏感性。结果与空白对照组比较,miR-605模拟物(miR-605 mimic)组中miR-605的表达水平明显升高,miR-605抑制剂(miR-605 inhibitor)组中miR-605的表达水平明显降低,差异有统计意义(P 0.05);细胞克隆法实验结果显示,照射后miR-605模拟物组的细胞活力水平高于空白对照组,miR-605抑制剂组的细胞活力水平低于空白对照组,miR-605模拟物组的细胞凋亡水平低于空对照组,miR-605抑制剂组的细胞凋亡水平高于空白对照组,差异有统计意义(P 0.05);照射后miR-605模拟物组TNFAIP3蛋白表达低于空白对照组(P 0.05),miR-605抑制剂组TNFAIP3蛋白表达高于空白对照组; miR-605模拟物能抑制TNFAIP33'-UTR报告基因的荧光素酶活性,miR-605抑制剂能提高TNFAIP3 3'-UTR报告基因的荧光素酶活性;照射后(6Gy) pcDNA-TNFAIP3组的细胞活力水平低于空白对照组,差异有统计学意义(P 0.05)。结论下调miR-605后能够增强非小细胞肺癌细胞A549的放射敏感性,其机制可能是上调了TNFAIP3的表达。

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