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TLR3激动剂对体外NK细胞抗肿瘤活性的影响及机制

廖春香  安媛媛  车启元  陈亮  龙世棋  王念雪  杨薇  赵星  
【摘要】:目的探讨TLR3激动剂Poly(I∶C)转染对体外扩增的人自然杀伤(NK)细胞抗肿瘤活性的影响及可能机制。方法将体外扩增的人NK细胞分为Poly-NK_(elect.)组[人NK细胞经电穿孔转染Poly(I∶C)]、Poly-NK组[脂质体介导的Poly(I∶C)并转染人NK细胞]以及NK组(单独NK细胞),采用CCK-8法检查3组细胞对人结直肠癌细胞株DLD-1细胞的杀伤率;根据实验结果选择Poly-NK组细胞进行后续实验,Poly-NK组细胞经TLR3/ds RNA复合物抑制剂处理(Poly-NK_(inhib.)组)及TLR3下游的TBK1/IKKε复合物抑制剂BX795处理(PolyNK+BX组),采用CCK-8法检测这两组细胞对DLD-1细胞的杀伤率,流式细胞仪检测这两组NK细胞活化标志物CD69的表达,ELISA检测干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及穿孔素(perforin)的表达水平。结果与NK组比较,Poly-NK_(elect.)组和Poly-NK组对DLD-1细胞的杀伤率增加(P 0.05);与Poly-NK_(elect.)组比较,Poly-NK组对DLD-1细胞的杀伤率更高(P 0.01),因此后续试验均采用Poly-NK组进行比较;与Poly-NK组比较,Poly-NK+BX组对DLD-1细胞的杀伤率降低(P 0.01)、CD69表达降低(P 0.05)、perforin及IFN-γ表达降低(P 0.05);与Poly-NK组相比,Poly-NK_(inhib.)组对DLD-1细胞的杀伤率降低(P 0.05)、CD69的表达下降(P 0.05)、TNF-α及IFN-γ的表达降低(P 0.05)。结论 Poly(I∶C)可促进人NK细胞的体外抗肿瘤活性,TBK1/IKKε激酶复合体可能参与了Poly(I∶C)对人NK细胞的活化。

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