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miR-30e-3p调控的自噬对缺血缺氧致H9c2心肌细胞损伤的保护作用

苏波  龙曼云  郑静  李浪  
【摘要】:目的:研究miR-30e-3p在缺血缺氧(IH)环境中对H9c2心肌细胞自噬的调控,以及对心肌细胞损伤的影响。方法:使用H9c2心肌细胞进行体外研究,将慢病毒作为载体转染H9c2心肌细胞以上调或者抑制miR-30e-3p表达。根据本课题组前期研究取9 h作为干预时间点,将H9c2心肌细胞随机分为6组,分别为正常对照(Con)组、IH组、IH+miR-30e-3p阴性对照(IH+NC)组、IH+miR-30e-3p mimic(IH+MIR)组、IH+miR-30e-3p inhibitor(IH+MIR inhibitor)组和IH+miR-30e-3p mimic+3-MA(IH+MIR+3-MA)组。以实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测miR-30e-3p表达水平,MTS法检测心肌细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)测定心肌细胞损伤,蛋白质印迹(Western blotting)检测自噬关键蛋白LC3与p62表达变化,共聚焦显微镜观察细胞自噬流。结果:与Con组比较,IH组miR-30e-3p表达与心肌细胞存活率下降,心肌细胞损伤增加,自噬蛋白LC3Ⅱ表达减少,p62表达升高(均P0.05);与IH组比较,过表达miR-30e-3p后心肌细胞存活率升高,心肌损伤减少,LDH、自噬蛋白LC3Ⅱ表达增加,p62表达降低,同时自噬流增多(均P0.05)。结论:过表达miR-30e-3p能增加IH环境中H9c2心肌细胞自噬,减轻细胞损伤,起到保护心肌细胞的作用。

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