收藏本站
收藏 | 投稿 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

转录因子E2F-1基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定

王晓通  李雷  钱倩  谢玉波  肖强  
【摘要】:目的:构建细胞周期相关转录因子E2F-1RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体。方法:选取E2F-1基因的19nt特异性序列,设计针对E2F-1的shRNA序列,应用基因重组技术克隆到pLentiLox3.7(pLL3.7)慢病毒表达载体中,XbaI和NotI进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆,在脂质体的介导下将慢病毒的混合包装载体质粒和包含E2F-1基因RNAi的重组慢病毒载体共转染293FT细胞,包装成病毒48h后,收集病毒颗粒,孔稀释法测定病毒滴度。结果:双酶切证实shRNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确;293FT细胞包装E2F-1基因RNAi的重组慢病毒载体成功;收集的细胞培养上清液中,病毒的滴度为5×107TU/mL。结论:成功构建人E2F-1基因RNAi慢病毒载体,为研究E2F-1对于胃癌生长的影响提供了稳定的转染细胞载体。

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李英明;陈燕慧;;慢病毒载体介导RNAi的研究进展[J];生物技术通报;2009年07期
2 孙梅;李金东;姜睿;高楠;金成彦;罗树立;王荣有;张兴义;;大鼠CD80基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定[J];中国免疫学杂志;2009年11期
3 黄黎珍;刘光泽;顾为望;;慢病毒载体法制备转基因动物研究进展[J];实验动物与比较医学;2007年01期
4 彭徐;;慢病毒载体研究进展[J];西昌学院学报(自然科学版);2007年03期
5 叶礼红;舒晓春;邬伟民;鲁红云;孟晓军;孙辽;;TIEG特异的siRNA慢病毒载体的构建及鉴定[J];中国现代医学杂志;2009年17期
6 左雨娜;焦德敏;于慧慧;张铸业;李宙阳;袁军;刘爱和;王彦刈;;一种简单的慢病毒载体介导的同时沉默双基因的方法[J];中国现代医学杂志;2010年03期
7 马强;李明;董文其;吴英松;;一种新型慢病毒载体制备体系的初步建立[J];生物化学与生物物理进展;2007年08期
8 黄芳;王毅刚;蔡荣;杨光华;钱程;;可诱导慢病毒载体的优化策略及应用[J];细胞生物学杂志;2007年06期
9 窦立萍;达万明;王畅;康慧媛;赵瑜;孙敬芬;靳海杰;王全顺;高春记;于力;;Kir2ds4基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定[J];中国实验血液学杂志;2008年03期
10 周军智;邹永康;李建国;刘楠乔;蔡亚非;王根林;;含PGK启动子慢病毒表达质粒的构建与鉴定[J];安徽师范大学学报(自然科学版);2009年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 黄宪章;王前;郑磊;陈晓;熊石龙;包杰;丁海明;黄妩姣;庄俊华;;人CDK2基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年
2 熊石龙;王前;郑磊;包杰;黄宪章;刘竞争;曾方银;裘宇容;;慢病毒携带shRNA对内皮细胞组织因子表达的抑制作用[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年
3 郭瀛军;郭嘉;张术;王开宇;高远舰;何颖;孙树汉;;慢病毒载体在疫苗研究中的应用[A];2005全国第二届核酸疫苗研讨会论文集[C];2005年
4 姚玉霞;姜慧卿;任锡玲;张晓岚;陈文磊;孙泽明;宋梅;;幽门螺杆菌感染的胃黏膜上皮细胞E2F-1表达与其增殖和凋亡的相关性研究[A];第三届中日消化内镜及胃肠病学术会议论文汇编[C];2004年
5 蔡柳洪;周灿权;张滨;陶欣;林慧;;慢病毒载体介导2次转基因对人胚胎干细胞特性的影响[A];2009年国际病理生理学教学研讨会论文集[C];2009年
6 程娜;;RNA干扰与基因治疗[A];中国生物医学工程进展——2007中国生物医学工程联合学术年会论文集(下册)[C];2007年
7 林燕燕;林凤珠;胡雪峰;黄义德;张彦定;;Sfrp3表达下调对小鼠牙齿发育的影响[A];中国细胞生物学学会第九次会员代表大会暨青年学术大会论文摘要集[C];2007年
8 周晓玲;陈冬玲;宋兆建;蔡得田;;多倍体与基因工程相结合创造不落毛法国梧桐新品系[A];湖北省遗传学会、江西省遗传学会2006年学术年会暨学术讨论会论文摘要集[C];2006年
9 翟金玲;高艳梅;徐远峰;罗越华;邓用川;林栖凤;黄惜;;利用GATEWAY~(TM)技术构建番木瓜环斑病毒CP基因的RNAi表达载体[A];第五次全国植物分子育种代表大会暨学术交流会论文集[C];2008年
10 陈愉生;李鸿茹;陈刚;谢宝松;;LivinsiRNA慢病毒载体的构建及外源性筛靶[A];第五届中国肿瘤学术大会暨第七届海峡两岸肿瘤学术会议、国际肿瘤细胞与基因治疗学会会议、第二届中日肿瘤介入治疗学术会议论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 杨德君;应用RNAi技术对大肠癌ECGF1基因生物功能的研究[D];吉林大学;2006年
2 吴镝;抑制纤维连接蛋白的合成诱导大鼠系膜细胞凋亡的机制研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2005年
3 王丹青;小干扰RNA表达载体抑制子宫颈癌HPV16 E7基因的研究[D];四川大学;2005年
4 王志峰;成对盒基因Pax9的亚细胞定位及对细胞生物学行为的调控研究[D];武汉大学;2005年
5 杨志峰;应用慢病毒载体介导RNA干扰在MCF-7细胞中剔降IKKα基因和制备转基因小鼠模型的研究[D];第二军医大学;2006年
6 魏映辉;双色荧光RNAi技术平台的建立和抗SARS-CoV RNAi的研究[D];吉林大学;2005年
7 王炜;RNAi阻断B7/CD28共刺激通路在小鼠心脏移植中的抗排斥反应作用[D];天津医科大学;2005年
8 邸军;慢病毒载体介导人IL-12基因修饰树突状细胞体外抗肺癌作用的研究[D];吉林大学;2009年
9 钱建平;携带绿色荧光蛋白基因的慢病毒载体转染几种皮肤结构重要细胞的实验研究[D];中国协和医科大学;2008年
10 陈继达;大鼠胚肝细胞肝内移植和慢病毒载体Lenti-lacZ的表达[D];浙江大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 姚玉霞;幽门螺杆菌感染胃黏膜上皮细胞E2F-1表达与其增殖调亡的相关性研究[D];河北医科大学;2004年
2 罗晶;应用RNAi技术干扰线虫ctl-2基因表达及早衰模型的建立[D];吉林大学;2006年
3 林长贵;慢病毒载体介导nanog基因修饰小鼠骨髓间充质干细胞[D];福建医科大学;2008年
4 李伟;大鼠CRX基因的重组慢病毒载体LV-Rho-EGFP/CRX的构建和表达[D];中南大学;2008年
5 原向伟;人骨肉瘤中P14ARF、P53和E2F-1的表达及其意义[D];郑州大学;2004年
6 宋斌;针对PTI-1(PC-3)的RNA干涉对人前列腺癌细胞生长的影响[D];第四军医大学;2005年
7 李宏图;RNAi诱导小鼠ES细胞向神经细胞分化的研究[D];中国医科大学;2006年
8 王崇龙;RNAi技术抑制家蚕杆状病毒增殖研究[D];苏州大学;2006年
9 杨健;RNA干扰体外抑制HBeAg表达的实验研究[D];重庆医科大学;2005年
10 王栋;编码t-PA基因慢病毒载体的构建及其制备体系的建立[D];山东师范大学;2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 蒋立明;建立研发基地 开发高新技术[N];绍兴日报;2009年
2 黄爱萍 徐积明;寻找“超日赶美”的突破口[N];苏州日报;2009年
3 刘春英;掌握理论技术 推进源头创新[N];中国医药报;2009年
4 谷文;百奥迈科与Benitec开发新型小核酸干扰抗乙肝药物[N];中国医药报;2009年
5 辛紫;中国俩科学家创新项目入选[N];医药经济报;2009年
6 刘霞;科学家发现天然抗流感蛋白[N];科技日报;2009年
7 晓燕 编译;胆固醇代谢可能与疟疾感染有关[N];中国医药报;2008年
8 邵建国;2008年产品合作案10强[N];医药经济报;2009年
9 记者 白毅;北京蛋白质组研究中心科研成果骄人[N];中国医药报;2009年
10 本报记者 郑灵巧;十万美元验证一个新点子[N];健康报;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978