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荧光猝灭法研究NADH、Thio-NAD~+与3α-HSD的相互作用

连国军  赵长容  刘文涵  方芳  曹建明  
【摘要】:采用荧光猝灭法研究了两种辅酶,还原型烟酰胺嘌呤二核苷酸(NADH)、氧化型硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Thio-NAD+)与3α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)的相互作用。研究结果表明,NADH和Thio-NAD+的加入均能使3α-HSD的内源性荧光发生猝灭,其猝灭机制均属于生成复合物的静态猝灭;25℃下NADH、Thio-NAD+与3α-HSD的结合常数分别为7.38×104、1.23×104L.mol-1;37℃下NADH、Thio-NAD+与3α-HSD的结合常数分别为4.69×104、9.74×103L.mol-1;NADH与3α-HSD的结合作用力为氢键和范德华力,Thio-NAD+与3α-HSD的结合作用力主要为静电引力和疏水作用力;NADH和Thio-NAD+均能使3α-HSD构象发生变化,导致色氨酸残基所处环境极性增大。

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