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华蟾素对转化生长因子-β1诱导肝星状细胞激活的作用及机制研究

汪玉倩  徐可  詹月萍  陈轶斐  殷佩浩  
【摘要】:目的 研究华蟾素对人肝星状细胞(HSCs)LX-2活化的影响及其可能的分子机制。方法 将LX-2细胞分为空白组,对照组和华蟾素低、中、高实验组。空白组予以完全培养基进行培养,对照组予以含10 ng·mL~(-1)转化生长因子-β1(TGF-β1)的培养基处理,华蟾素低、中、高实验组在对照组的基础上分别予以0.5,1和2 mg·mL~(-1)华蟾素处理。以细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验检测华蟾素对人肝星状细胞系LX-2细胞增殖的影响;以蛋白质印迹(Western blot)法检测各组细胞中α-平滑肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原(Collagen-Ⅰ)蛋白的表达;以实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测α-SMA和Collagen-ⅠmRNA的表达情况;以免疫荧光法检测各组细胞α-SMA蛋白的表达。结果 Western blot和RT-PCR结果显示随着TGF-β1浓度的递增,α-SMA、Collagen-Ⅰ在LX-2细胞中的表达增强,差异有统计学意义(P0.01);表明TGF-β1可诱导LX-2细胞活化增殖。CCK-8实验测得华蟾素对于LX-2细胞的半数抑制浓度为2 mg·mL~(-1)。Western blot结果显示对照组,华蟾素低、中、高实验组α-SMA蛋白表达水平分别为1.00±0.04,0.62±0.03,0.48±0.01和0.36±0.01,Collagen-Ⅰ蛋白表达水平分别为1.00±0.04,0.52±0.03, 0.18±0.01和0.06±0.01;免疫荧光结果显示空白组,对照组,华蟾素低、中、高实验组α-SMA表达水平分别为1.00±0.01,19.84±0.04,4.85±0.02,2.15±0.03,1.11±0.02;RT-PCR结果显示对照组和华蟾素低、中、高实验组α-SMA mRNA表达水平分别为1.00±0.04,0.68±0.01,0.34±0.02,0.25±0.03,Collagen-Ⅰ表达水平分别为1.00±0.04,0.69±0.01,0.21±0.03,0.11±0.02,以上结果华蟾素低、中、高实验组与对照组比较,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论 华蟾素可抑制TGF-β1诱导的LX-2细胞的增殖活化,从而抑制肝纤维化。

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