高效液相色谱-串联质谱法同时测定人全血中硫胺素及其2种磷酸酯的浓度

【摘要】：目的建立一种同时测定人全血中的硫胺素、一磷酸硫胺素(TMP)和焦磷酸硫胺素(TPP)浓度的高效液相色谱-串联质谱方法。方法以[~2H_3]-硫胺素为内标,样本用三氯乙酸沉淀蛋白后进高效液相色谱-串联质谱系统(HPLC-MS/MS)分析。色谱柱:Zorbax Extend-C_(18)(50.0 mm×4.6 mm,3.5μm),流动相:含0.1%氨水的10 mmol·L~(-1)乙酸铵水溶液-80%的乙腈水溶液,流速:0.60 mL·min~(-1),梯度洗脱,柱温:35℃,进样量:10.0μL。用电喷雾离子源,多反应监测模式,正离子扫描检测。考察该方法的专属性、标准曲线与定量下限、精密度与回收率、基质效应和稳定性。结果硫胺素和TMP在0.25～50.00 ng·mL~(-1),TPP在2.50～500.00 ng·mL~(-1)内,线性相关系数均大于0.99;硫胺素、TMP和TPP的定量下限分别为0.25,0.25和2.50 ng·mL~(-1);日内和日间精密度在3.27%～11.70%,准确度在86.56%～104.04%,提取回收率在85.54%～104.98%。内标对基质效应具有较好的校正作用,且稳定性良好。结论本方法操作简便快速,准确可靠,适用于3种维生素B1在人全血中浓度的检测。